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Matriz extracelular de biofilmes de Candida Albicans e Candida glabrata susceptíveis e resistentes ao fluconazol: caracterização, ação de enzimas hidrolíticas e eficácia da associação das enzimas à terapia fotodinâmica

Processo: 14/18804-1
Linha de fomento:Bolsas no Brasil - Doutorado
Vigência (Início): 01 de dezembro de 2015
Vigência (Término): 31 de julho de 2017
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
Pesquisador responsável:Ana Cláudia Pavarina
Beneficiário:Beatriz Helena Dias Panariello
Instituição-sede: Faculdade de Odontologia (FOAr). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara, SP, Brasil
Vinculado ao auxílio:13/07276-1 - CEPOF - Centro de Pesquisa em Óptica e Fotônica, AP.CEPID
Bolsa(s) vinculada(s):16/00256-3 - A matriz extracelular de biofilmes de Candida Albicans e Candida glabrata, BE.EP.DR
Assunto(s):Candida glabrata   Candida albicans

Resumo

As infecções causadas por Candida spp. são frequentemente associadas a formação de biofilme, uma microestrutura complexa de células aderidas a uma superfície e incorporadas dentro de uma matriz extracelular (MEC). A resistência dos biofilmes de Candida spp. é multifatorial e associada a fatores como o efeito protetor da MEC do biofilme realizado pelas beta-glucanas, que se ligam ao fluconazol e à anfotericina B, impedindo a penetração das drogas no biofilme. Além do efeito protetor da MEC realizado pelas beta-glucanas, foi demonstrado que o DNA extracelular (eDNA) também contribui para a integridade estrutural do biofilme. Estudos que avaliam a eficácia da PDT sugerem que a terapia é efetiva e promove completa inativação dos micro-organismos em suspensão, entretanto, a completa inativação dos mesmos organizados em biofilmes ainda não foi observada. Provavelmente, isso ocorre devido ao efeito protetor da MEC do biofilme, que dificulta a ação do agente fotossensibilizador. Outro aspecto importante é que as espécies resistentes a antifúngicos também têm sem mostrado mais resistentes à PDT. Sendo assim, inicialmente este projeto visa realizar a avaliação comparativa da MEC dos biofilmes de cepas de Candida albicans e Candida glabrata susceptíveis e resistentes à fluconazol através de contagem de colônias, análise do peso seco, quantificação de proteínas pelo método de Bradford, análise de polissacarídeos solúveis em água (WSP), análise de polissacarídeos solúveis em álcali (ASP) e análise de eDNA. A seguir, será determinada a melhor associação de enzimas hidrolíticas que possibilitariam a degradação de componentes da MEC destes biofilmes através de sua associação com as enzimas DNase, Dextranase ou beta-glucanase. A eficácia da utilização das enzimas será avaliada utilizando a mesma metodologia. Além disso, a estrutura dos biofilmes após os diferentes períodos de incubação com as enzimas será avaliada através de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e Microscopia Confocal a Laser. A partir desses resultados será verificado se a ação da terapia fotodinâmica mediada pelos fotossensibilizadores Curcumina e Photodithazine® seria ou não favorecida quando associada a estas enzimas. Para tal, serão realizados os seguintes testes: contagem de colônias, análise do peso seco, quantificação de proteínas pelo método de Bradford, análise de polissacarídeos solúveis em água (WSP), análise de polissacarídeos solúveis em álcali (ASP), análise de eDNA, MEV e microscopia confocal a laser. Os dados encontrados serão submetidos às análises estatísticas mais adequadas para cada condição experimental. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DIAS PANARIELLO, BEATRIZ HELENA; KLEIN, MARLISE I.; PAVARINA, ANA CLAUDIA; DUARTE, SIMONE. Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology. JOURNAL OF ORAL MICROBIOLOGY, v. 9, OCT 17 2017. Citações Web of Science: 1.
Publicações acadêmicas
(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)
BEATRIZ HELENA DIAS PANARIELLO. Influência de alterações genéticas, do fluconazol e de enzimas hidrolíticas na matriz extracelular de biofilmes de candida susceptível e resistente a fluconazol. 2017. 116 f. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista "Júlio de Mesquita Filho" Faculdade de Odontologia (Campus de Araraquara)..

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