Generation and analysis of plasmids immunogecity containing subdominant CD8 epitopes expressed in "Trypanosoma cruzi"

• Grant number: 07/07854-4
• Support Opportunities: Scholarships in Brazil - Scientific Initiation
• Start date: June 01, 2008
• End date: December 31, 2008
• Field of knowledge: Biological Sciences - Immunology - Immunogenetics
• Principal Investigator: Maurício Martins Rodrigues
• Grantee: Mariana Ribeiro Dominguez
• Host Institution: Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia. Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brazil

Abstract

RESUMO DO PROJETOA infecção pelo protozoário intra-celular Trypanosoma cruzi atualmente atinge cerca de 15 milhões de pessoas nas América e o tratamento com terapias convencionais, apresenta baixa eficácia. Assim, há um grande interesse em que seja desenvolvida uma imunoterapia capaz de reduzir o grau de lesões no tecido miocárdico ou mesmo que possa impedir o surgimento delas. Baseado neste fato, diversos grupos de pesquisadores vem trabalhando com imunizações a partir de plasmídios contendo genes de T. cruzi, as quais vem apresentando respostas imunes celulares capazes de reduzir a parasitemia, mortalidade e a patologia em modelos experimentais murinos.Nos trabalhos publicados até agora pelo nosso grupo, foram usados genes contendo epítopos CD8 imunodominantes da cepa Y ou Tulahuén de T. cruzi. Os resultados foram conclusivos de que a indução de resposta imune contra epítopos imunodominantes pode ser uma estratégia viável para a indução de imunidade contra a infecção chagásica. Entretanto, estes resultados não excluem a possibilidade que a indução de resposta imune contra epítopos sub-dominantes possa melhorar a resposta imune, tornado-a mais ampla.A recente caracterização de epítopos sub-dominantes reconhecidos por linfócitos T CD8 em diversas linhagens de camundongos nos permite agora testar a hipótese de qual seria o papel da resposta imune a estes epítopos durante as vacinações experimentais.Baseado nestas observações serão os objetivos específicos deste projeto:A)Por mutagênese sítio dirigida, gerar plasmídios no qual o epítopo CD8 imundominante foi removido.B)Também por mutagênese sítio dirigida, gerar plasmídios no qual o epítopos CD8 imundominante será trocado por um epítopo sub-dominante.C)Analisar por sequenciamento se as mutações foram introduzidas com sucesso.D)Produzir estes plasmídios em larga escala.E)Fazer imunizações experimentais com um plasmídio já construído denominado pRE-P4P7 que contém somente o epítopo TEWETGQI mas não o epítopo VNHRFTLV da ASP-2.F)Se houver tempo, testar a imunogenicidade dos novos plasmídios em modelos experimentais.Devido a complexidade do projeto, não é esperado que seja concluído em 12 meses. Entretanto os reagentes gerados serão posteriormente utilizados como projeto de tese de doutoramento direto da estudante.