Regulação transcricional do gene slc2a2 em fígado de animais com esteato-hepatite não alcoólica.

Resumo

A EHNA (Esteato-hepatite Não Alcoólica) caracteriza-se por acúmulo de gordura hepática associada a um quadro de resistência à insulina, e, portanto, está associada a alterações de fluxo de glicose no hepatócito. Nos fluxos de glicose no hepatócito (influxo ou efluxo), o transportador de glicose GLUT2 desempenha papel chave, com a co-participação de enzimas do metabolismo da glicose. Aumento na expressão do GLUT2 já foi demonstrado em hepatócitos humanos HepG2 que desenvolvem acúmulo de triglicerídeos após cultura em alta concentração de ácido oléico. Desta forma, espera-se que ocorra alteração na expressão do SLC2A2 (gene codificador do GLUT2) em animais com EHNA.No fígado, o equilíbrio entre a atividade das enzimas glicoquinase (GK), glicose-6-fosfatase (G6Pase) e fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK), juntamente com o GLUT2, representam um importante controle para a captação ou liberação de glicose hepática. Além disso, estas enzimas têm sido descritas como envolvidas com o quadro de esteatose hepática, podendo portanto estarem envolvidas na EHNA.Foi identificado que os fatores transcricionais HNF-1 alpha, HNF-3 beta, HNF-4alpha (Hepatocyte Nuclear Factor) altamente expressos em fígado, e o NFkB (Nuclear Factor), relacionado à atividade inflamatória, regulam genes importantes para o metabolismo e o transporte da glicose. Em relação ao SLC2A2, nosso grupo já demonstrou em fígado e rim de animais diabéticos um aumento na expressão do mRNA, que se relacionou com aumento da atividade de ligação de HNF-1 alpha, HNF-3 beta, HNF-4alpha no promotor do SLC2A2, efeito este que foi revertido pelo tratamento com insulina. Estes dados ressaltam a importância dos HNFs na regulação do gene SLC2A2. Nossa hipótese é que na EHNA ocorra alteração na expressão do SLC2A2, determinada por alteração na atividade transcricional de HNF-1 alpha, HNF-3 beta, HNF-4alpha, ou ainda do NFkB (importante mediador de citocinas inflamatória). Nosso objetivo é investigar em modelo experimental de EHNA a regulação da expressão do gene SLC2A2, e a participação dos fatores HNF-1 alpha, HNF-3 beta, HNF-4alpha, e NFkB nessa regulação. Para tal, em camundongos obesos por tratamento com glutamato monossódico e suplementados com dieta hiperlipídica, será investigado: o grau de esteato-hepatite (análise histológica do fígado), a presença de atividade inflamatória (avaliação de citocinas inflamatórias no fígado e no plasma) e de resistência à insulina (glicemia, insulinemia e teste de tolerância à insulina), a expressão do mRNA do GLUT2, GK, G6Pase, PEPCK, HNF-1 alpha, HNF-3 beta, HNF-4alpha e NFkB no fígado (PCR em tempo real), a atividade de ligação dos fatores transcricionais ao promotor do gene SLC2A2 in vitro (ensaio de mobilidade eletroforética, EMSA) e in vivo (ensaio de imunoprecipitação da cromatina (ChIP assay). Desta forma, espera-se caracterizar a regulação da expressão do SLC2A2 na EHNA, o que pode contribuir para estabelecer mecanismos preventivos ou terapêuticos que controlem fluxo hepático de glicose nesta doença.