Efeitos de simbióticos e indol 3-carbinol na expressão de genes relacionados à carcinogênese de cólon em ratos alimentados com dieta contendo heme

Resumo

O presente estudo tem como objetivo avaliar o efeito preventivo de simbiótico (prebiótico inulina associado ao probiótico Bifidobacterium bifidus) e do indol-3-carbinol sobre o processo de carcinogênese química de cólon induzido pela, 1,2-dimetilhidrazina (DMH) em ratos Wistar alimentados com dieta com adição de heme. Os animais serão divididos em sete grupos com 10 a 22 animais cada, os animais dos grupos 1 a 6 e do grupo 7 receberão quatro injeções subcutâneas de DMH (40 mg/Kg) e solução de EDTA (veículo da DMH) nas duas semanas iniciais do experimento, respectivamente. Os animais dos grupos 1 e 7 receberão ração basal até o final do experimento, os animais dos grupos 2 a 6 receberão respectivamente ração basal com adição de heme (0,32 g/kg de ração), ração basal com adição de heme (0,32 g/kg de ração)+ simbiótico (inulina + Bifidobacterium bifidum 2,5 x 1010 de UFC por kg de ração), ração basal com adição de heme (0,32 g/kg de ração) + indol-3-carbinol (1g/kg de ração), ração basal + simbiótico (inulina + Bifidobacterium bifidum 2,5 x 1010 de UFC de ração) e ração basal + indo- 3-carbinol (2g/kg de ração). Os animais serão sacrificados na 12a e 22a semanas do experimento. O cólon (medial e distal) será removido e mergulhado em fixador (24 h) e armazenado em álcool 70%. O cólon será corado com azul de metileno a 2% para detecção estereoscópica de FCA (incidência e multiplicidade) e após a análise de FCA os cólons serão processados para obtenção de cortes histológicos para classificação do grau de displasia dos FCA e detecção da expressão imunoistoquímica de B-catenina (FCA B-catenina positivos), Ki-67 e caspase 3 clivada. Amostras de tumores serão congeladas em nitrogênio líquido e armazenadas em biofreezer -80 oC. A expressão de genes que regulam vias de proliferação celular e apoptose será analisada nas amostras tumorais pela técnica Taqman® Low Density Array (TLDA). O restante dos tumores será mergulhado em fixador (24 h) e armazenado em álcool 70% e posteriormente processado para obtenção de cortes histológicos e expressão imunoistoquímica para B-catenina (FCA B-catenina positivos), Ki-67 e caspase 3 clivada e demais marcadores selecionados após análise de expressão gênica. (AU)