Biocompatibilidade de substâncias utilizadas para prevenção ou eliminação de biofilme: avaliação do metabolismo celular.

Resumo

Em próteses odontológicas e dispositivos médicos, diferentes biomateriais, incluindocerâmica e liga de titânio, podem ser revestidos com TiO2 e AgTiO2, objetivando melhorar as suaspropriedades biológicas, particularmente com relação à adesão e à proliferação de microorganismos.Entretanto, a biocompatibilidade de diferentes biomateriais revestidos com nanopartículas ainda não foi avaliada e, assim, estudos são necessários objetivando melhorar suaperformance in vivo. Dessa forma, o objetivo do presente estudo será avaliar a citotoxicidade debiomateriais revestidos com nanopartículas de TiO2 e AgTiO2 por meio de diferentes testes, afim de torná-los viáveis para o uso clínico na prevenção de biofilmes. Para isso, serão avaliados 4 biomateriais: 1 cerâmica reforçada com leucita, 1 liga de titânio, alumínio e vanádio (Ti-6Al-4V), 1 polimetilmetacrilato e 1 silicone de adição. Para cada uma das condições experimentais, corpos de prova (10 mm de diâmetro por 1 mm de espessura) de cada biomaterial serão preparados e divididos em três grupos (n=9): não revestidos (controle); revestidos por TiO2; revestidos por AgTiO2. Para a análise do efeito citotóxico das substâncias liberadas pelos corpos-de-prova, serão obtidos extratos das substâncias hidrossolúveis dessas amostras. Para isso, três corpos-de-prova de cada grupo experimental, serão colocados dentro de tubos de ensaio com 9 ml de meio de cultura DMEM e incubados por 24 horas. Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 ul da suspensão composta de 1,0 x 105 células/ml serão colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios,incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura será desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa, e 50 ul de meio de cultura novo serão colocados em cada orifício da placa juntamente com 50 ul do extrato contendo as substâncias liberadas pelos corpos de prova, a qual será incubada por 24 horas. Após o período deincubação, serão avaliadas a proliferação celular por meio do teste Alamar Blue, a viabilidade celular por meio do nível de ATP (adenosine triphosphate) e a integridade da membrana celular das células viáveis. Os resultados do metabolismo celular das células viáveis após o contato com os extratos dos materiais estudados, serão submetidos ao método estatístico mais adequado e o nível designificância de 5% será selecionado (±=0.05). Além disso, para cada teste, os resultados serãocomparados com o controle negativo e os tratamentos nos diferentes grupos experimentais serão classificados de acordo com o efeito citotóxico em escores de 0 a 3.