Estudo funcional em carcinomas de pênis para validação de marcadores moleculares candidatos obtidos de análises globais integradas (genômica, transcriptômica e metilação do DNA)

Resumo

O câncer de pênis (CaPe) apresenta distribuição geográfica disntinta sendo uma doença rara em países desenvolvidos e altamente frequente em países pobres e em desenvolvimento, como o Brasil. Apesar do seu comportamento imprevisível e tratamento agressivo, há um número muito limitado de dados sobre os mecanismos moleculares e epigenéticos envolvidos na doença. Nosso grupo tem utilizado estudos em larga escala (perfil de metilação do DNA, expressão de transcritos, miRNA e alterações genômicas) em CaPe, com o objetivo de caracterizar as alterações moleculares neste tipo tumoral assim como identificar marcadores moleculares envolvidos no desenvolvimento e progressão da doença. O grupo também desenvolveu algoritmos e outras ferramentas de bioinformática para a integração dos dados obtidos pelas diferentes estratégias, a fim de se identificar potenciais drivers em CaPe. O objetivo deste projeto é realizar a validação dos genes provenientes da análise de integração dos dados, além de estabelecer linhagens celulares usando estratégias de xenotransplantes e avaliar o potencial de células tronco tumorais no desenvolvimento deste tumor. Serão utilizadas nesse estudo RT-qPCR (mRNA e miRNA), pirosequenciamento (metilação), cultivo e expansão de células de CaPe in vivo utilizando camundongos imunodeficientes e subsequente isolamento de células tronco tumorais (CTT) (citometria de fluxo). Os tumores gerados nos animais serão ainda avaliados por metodologias de análises globais a fim de se verificar se estes recapitulam o tumor original. O uso de metodologias de análises globais é a principal etapa para a descoberta de marcadores que possam contribuir para o entendimento dos mecanismos genéticos e epigenéticos envolvidos no CaPe. Os resultados provenientes dessas análises, somadas ao uso de modelos animais fornecerá subsídios para o desenho de terapias alvo específicas e análises funcionais, que são até o momento inexistentes neste tumor.