Análise e modulação da metilação da H3K9 em células somáticas de bovinos

Resumo

Os mecanismos epigenéticos são responsáveis por diversas funções celulares. Dentre eles, está a memória epigenética mantida durante a divisão celular. A consolidação desta informação é feita por estruturas químicas estáveis como a metilação do DNA e as modificações de histonas. O conhecimento destes mecanismos possibilita o desenvolvimento de diversas estudos, como a reprogramação nuclear, que é influenciada diretamente por estas marcas epigenéticas. Neste contexto, a metilação da H3K9 tem se mostrado como uma das principais barreiras no processo de remodelação nuclear. No entanto, pouco se sabe sobre o epigenoma de animais de interesse zootécnico. Por isso, o objetivo principal desta proposta é investigar os genes diretamente regulados pela metilação da H3K9, bem como modular o padrão destas modificações. Para isso elaboramos duas estratégias. A primeira consiste na identificação em fibroblastos fetais bovinos (ffb) de todos os genes regulados através da metilação da H3K9 por meio da análise por ChIP-seq utilizando os anticorpos anti-H3K9me2 e H3K9me3. Na segunda estratégia visamos alterar os níveis destas modificações nos ffbs. Para tal, as enzimas metiltransferases de histona (G9a e SUV39h1) serão silenciadas através da técnica de siRNA. Por último, os ffbs silenciados serão analisadas quanto aos níveis de H3K9me2, H3K9me3, 5mC e H3K27. Vale ressaltar que este BEPE será realizado no laboratório do Dr. Pablo J. Ross, que possui vasta experiência no campo da epigenética de animais de pecuária. Esta proposta é inovadora e esperamos com seu resultado gerar conhecimentos que poderão ser aplicados em diversas áreas. Além disso, o objetivo principal desta proposta é o treinamento e capacitação do candidato para a execução das diferentes técnicas e análises inovadoras. (AU)