Mecanismos envolvidos no efeito protetor dos ácidos graxos de cadeia curta frente à colite associada ao Clostridium difficile

Resumo

Em condições fisiológicas, a colonização pelo Clostridium difficile, bacilo resistente a diversos agentes antimicrobianos, é restringida pelas bactérias comensais intestinais. Com o uso de antibióticos, há um desequilíbrio da microbiota e há a proliferação do mesmo, provocando quadros patológicos diversos. Sabe-se que os produtos do metabolismo bacteriano, os ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs), são produzidos durante o processo de fermentação de fibras alimentares e exercem um efeito protetor frente à infecções intestinais, tal como a causada pelo C. difficile. Entretanto, não se sabe ao certo os mecanismos moleculares por trás desses efeitos. Este trabalho tem por objetivo investigar a participação de vias ativadas pelos AGCCs na proteção observada em modelo murino de colite aguda por C. difficile. Especificamente, examinaremos a relevância do receptor acoplado à proteína G ativado por AGCCs, o FFAR2/GPR43, e do fator de transcrição induzido por hipóxia 1 (HIF-1), bem como a possível participação de miRNAs sobre as modificações na expressão gênica relevantes à cura. Para tal, utilizaremos modelos in vivo (animais nocautes de corpo inteiro para FFAR2 e com deleção tecido específico de HIF-1± e/ou Dicer, enzima envolvida na maturação de miRNA) e in vitro (células epiteliais intestinais HCT-116 ou organoides intestinais), nos quais faremos análises moleculares incluindo Western blotting, imunofluorescência, RT-qPCR para genes específicos e miRNAs, e análises histopatológicas incluindo análise de lâminas de cólon coradas como H&E, identificação de populações de leucócitos na lâmina própria e linfonodos mesentéricos por citometria de fluxo, bem como análise de mediadores inflamatórios por ELISA e da permeabilidade epitelial por marcação imunohistoquímica de proteínas relevantes ao processo e de translocação bacteriana e de FITC-dextran após infecção. Com este estudo pretendemos avançar no entendimento das interações entre a microbiota e o desenvolvimento de infecções intestinais e identificar novos alvos moleculares para intervenções terapêuticas na doença ocasionada por C.difficile. (AU)