Estudos Funcionais do Sistema de Secreção do Tipo VI e da Regulação Gênica por Fatores Sigma Alternativos em Xanthomonas citri

Resumo

Sistemas de secreção do tipo VI (SS6) de bactérias Gram-negativas são complexos proteicos que atuam na translocação de proteínas efetoras e/ou toxinas para células-alvo, exercendo papel fundamental na competição interespecífica, virulência e adaptação ao ambiente em diversas bactérias. A bactéria Xanthomonas citri subsp. citri é o agente causador da doença cancro cítrico, sendo capaz de infectar todas as plantas cítricas de importância na atividade agrícola. Estudo realizado por nosso grupo demonstrou o papel do SS6 de X. citri na resistência a predação pela ameba do solo Dictyostelium discoideum, característica que afeta de forma importante a capacidade de persistência e disseminação desta bactéria no ambiente. Este projeto visa a dar continuidade aos estudos funcionais do SS6 de X. citri, buscando compreender os mecanismos envolvidos na resistência a amebas e as vias de sinalização que ativam o SS6. Para isso, pretendemos identificar as proteínas secretadas pelo SS6, através de ensaios de translocação in vivo e de duplo híbrido em leveduras. Estudos para a caracterização de dois fatores sigma alternativos de X. citri, denominados EcfK e EcfL, demonstraram que EcfK é responsável pela regulação transcricional do SS6, enquanto EcfL promove a expressão de um conjunto pequeno de genes de função desconhecida. Fatores sigma alternativos são importantes reguladores da resposta ao ambiente em bactérias. Assim, este projeto também tem por objetivo identificar a via de ativação de EcfK, assim como a função de EcfL em X. citri. Para atingir os objetivos propostos serão usadas diversas ferramentas de genética bacteriana e bioquímica, como estudos fenotípicos de linhagens mutantes, fusões transcricionais a genes repórter e caracterização bioquímica das proteínas de interesse. (AU)