A caracterização da Rev-Erb-alfa em diferentes condições metabólicas: de camundongos a humanos

Resumo

Recentemente foi demonstrado que o receptor nuclear Rev-erb±, codificado pelo gene Nr1d1, desempenha um papel importante no músculo esquelético, regulando a capacidade de exercício e genes relacionados à atrofia. Foi demonstrado que esta molécula é altamente sensível ao treinamento crônico de endurance, mas até o presente momento, poucos dados estão disponíveis sobre as respostas da Rev-erb± no músculo esquelético ao modelo de exercício resistido. Outra descoberta importante foi que a obesidade inibiu a expressão do gene Nr1d1. Além disso, o Nr1d1 foi regulado negativamente em amostras de músculo esquelético de camundongos idosos, sugerindo que Rev-erb± é um forte candidato para a desregulação dos fatores relacionados ao envelhecimento. Portanto, o principal objetivo deste projeto é investigar o papel do Rev-erb± em resposta ao exercício de endurance, exercício de resistência, dieta rica em gordura e envelhecimento em camundongos e amostras de humanos. O tibial anterior (TA) de camundongos ICR com 8 semanas de idade e o TA e tecido adiposo de camundongos CD-1 serão utilizados para análise molecular de PCR quantitativo em tempo real e western blotting. O modelo celular usará células de músculo esquelético de humanos e células com siRNA para silenciar o gene codificador do Rev-erb±. Em seguida, as células serão submetidas a alongamento mecânico in vitro para mimetizar a contração muscular em exercício de força. Para este modelo, será realizada síntese proteica in vitro, PCR quantitativo em tempo real e western Blotting. Já para as amostras de humanos, o músculo vasto lateral de homens jovens e idosos saudáveis será utilizado para a análise molecular dos níveis de RNAm e proteína. O teste t não pareado ou análise de variância (ANOVA) de duas vias será usado para examinar as diferenças entre os grupos experimentais. Todas as análises estatísticas serão bilaterais e o nível de significância será definido em p<0,05. (AU)