Caracterização genômica e funcional de potenciais lncRNAs restritos a melanoma (RMELs)

• Processo: 18/04017-9
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de junho de 2018 - 31 de outubro de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Enilza Maria Espreafico
• Beneficiário: Enilza Maria Espreafico
• Instituição-sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Transformação celular neoplásica Neoplasias Melanoma RNA longo não codificante Técnicas de silenciamento de genes Superexpressão gênica

Resumo

Os genes RMELs, primeiramente descritos pelo nosso grupo em 2010, são potenciais lncRNAs com expressão restrita a melanoma. Alta expressão dos RMELs 2, 3 e 4 (HCCAT5) se associa à BRAFV600E, a principal mutação condutora de tumorigênese em melanoma. Pesquisas em andamento em nosso laboratório indicam que o gene RMEL3 é um alvo das vias de MAPK e PI3K e o transcrito, por sua vez, parece fazer parte de um circuito de retroalimentação positiva dessas vias. Abordagens usando silenciamento e superexpressão indicaram que os quatro lncRNAs, objetos desse estudo, de maneiras e intensidades diferentes, promovem sobrevivência e proliferação de células de melanoma. Análises integradas de genômica e proteômica mostram que o silenciamento dos RMELs em células de melanoma afeta vias centrais relacionadas a proliferação/sobrevivência e resistência terapêutica aos inibidores de BRAF/MEK e imunoterapia. RMEL2 (OVAAL) é superexpresso em um menor número de casos de melanoma e linhagens celulares do que os outros RMELs e, embora o silenciamento de RMEL2 não afete a proliferação em condições normais de adesão, leva a uma redução significativa na capacidade de crescimento independente de ancoragem e mostra indícios de uma relação com resistência do melanoma ao tratamento com terapias alvo-dirigidas (BRAFi/MEKi). O RMEL1 apresenta correlação positiva de expressão com MITF e o programa de diferenciação melanocítica e o RMEL4 parece correlacionar-se com uma assinatura molecular de tumores não responsivos à imunoterapia, sendo que seu silenciamento inverte a assinatura em direção à responsiva. Encorajados por esses resultados, propomos aqui caracterizar esses lncRNAs quanto à estrutura, isoformas, interações moleculares, localização subcelular, capacidade de codificar polipeptídeos e bifuncionalidade. Interações com microRNAs e proteínas serão investigadas através de ensaios usando Luciferase como repórter e pulldown, respectivamente. Estudos funcionais utilizando metodologias de superexpressão e silenciamento (ou knockout por CRISPr) serão conduzidos in vitro e em modelo de tumorigênese em camundongos, visando explorar as funções desses lncRNAs e aplicabilidade em diferentes contextos biológicos e combinações de terapias alvo-dirigidas ou imunoterapia. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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ARAUJO, L. F.; SIENA, A. D. D.; PLACA, J. R.; BROTTO, D. B.; BARROS, I. I.; MUYS, B. R.; BIAGI JR, C. A. O.; PERONNI, K. C.; SOUSA, J. F.; MOLFETTA, G. A.; et al. Mitochondrial transcription factor A (TFAM) shapes metabolic and invasion gene signatures in melanoma. SCIENTIFIC REPORTS, v. 8, SEP 21 2018. (09/53853-5, 13/25119-0, 18/04017-9, 13/08135-2, 15/21940-7)

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