Novas abordagens visando diagnóstico rápido e diferencial da pitiose equina

• Processo: 18/08009-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de agosto de 2018 - 31 de julho de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Sandra de Moraes Gimenes Bosco
• Beneficiário: Sandra de Moraes Gimenes Bosco
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Giselle Souza da Paz ; João Pessoa Araújo Junior ; José Cavalcante Souza Vieira ; Lucilene Delazari dos Santos ; Marília Afonso Rabelo Buzalaf
• Assunto(s): Proteínas Micologia médica Pitiose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: imunoproteômica | lesão granulomatosa | pitiose | Proteinas | qPCR-HRM | Micologia Médica

Resumo

Causada pelo oomiceto Pythium insidiosum, a pitiose é uma doença emergente que ocorre em países de clima tropical e subtropical acometendo principalmente equinos, cães e humanos. A doença é de difícil diagnóstico, e frequentemente confundida com outras enfermidades que desenvolvem lesões granulomatosas em equinos. O tratamento da pitiose também é difícil, uma vez que, por ser um oomiceto, o patógeno não responde satisfatoriamente aos fármacos antifúngicos disponíveis devido à ausência de ergosterol na membrana plasmática, necessitando de procedimentos cirúrgicos. Desta forma, propomos a padronização e validação da técnica de qPCR e qPCR-HRM para o diagnóstico precoce e diferencial entre as lesões granulomatosas causadas por P. insidiosum e/ou fungos zigomicetos. Nas amostras que resultarem-se negativas para pitiose e/ou zigomicose, será realizado diagnóstico diferencial para habronemose e sarcóide equino. Para o desenvolvimento dessa etapa do estudo será padronizada uma qPCR para o diagnóstico específico de P. insidiosum utilizando os primers Pi1 e Pi2 derivados da região ITS1 do rDNA. Para a realização de um diagnóstico rápido e diferencial será implementada a qPCR-HRM para a diferenciação molecular de P. insidiosum e fungos zigomicetos, utilizando primers oriundos da região 18S do rRNA. As amostras negativas na qPCR-HRM serão submetidas a análise molecular para Habronema spp. e Papilomavírus bovino 1, 2 e 13 (agentes etiológicos de sarcóide equino), principais diagnósticos diferenciais de pitiose em equinos. Além disso, também será realizada a caracterização de proteínas totais deste oomiceto, bem como a avaliação da(s) proteína(s) imunodominante(s) de P. insidosum na pitiose equina, utilizando-se técnicas analíticas, tais como eletroforese bidimensional, Western blot, espectrometria de massas e bioinformática. A partir da caracterização da(s) proteína(s) imunodominante(s) é esperada a identificação de antígeno(s) do patógeno, o(s) qual(is) poderá(ão) auxiliar no diagnóstico da pitiose equina, bem como no desenvolvimento de um novo imunoterápico visando seu tratamento. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DA PAZ, GISELLE SOUZA; CAMARGO, GABRIEL GASPARINI; CURY, JOSE EDUARDO; APOLONIO, EMANUEL VITOR PEREIRA; GARCES, HANS GARCIA; DO PRADO, ANA CAROLINA; CHECHI, JESSICA LUANA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; WATANABE, MARCOS JUN; BAGAGLI, EDUARDO; et al. Outbreak of equine pythiosis in a southeastern region of Brazil: Environmental isolation and phylogeny. TRANSBOUNDARY AND EMERGING DISEASES, JUN 2021. (18/08009-0, 18/17596-7)

CHECHI, JESSICA LUANA; ROTCHANAPREEDA, TIWA; DA PAZ, GISELLE SOUZA; PRADO, ANA CAROLINA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; SOUZA VIEIRA, JOSE CAVALCANTE; RABELO BUZALAF, MARILIA AFONSO; RODRIGUES, ANDERSON MESSIAS; DELAZARI DOS SANTOS, LUCILENE; KRAJAEJUN, THEERAPONG; et al. Prospecting Biomarkers for Diagnostic and Therapeutic Approaches in Pythiosis. JOURNAL OF FUNGI, v. 7, n. 6, JUN 2021. (16/10804-8, 19/08761-7, 18/08009-0)

DA PAZ, GISELLE SOUZA; CAMARGO, GABRIEL GASPARINI; CURY, JOSE EDUARDO; APOLONIO, EMANUEL VITOR PEREIRA; GARCES, HANS GARCIA; DO PRADO, ANA CAROLINA; CHECHI, JESSICA LUANA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; WATANABE, MARCOS JUN; BAGAGLI, EDUARDO; et al. Outbreak of equine pythiosis in a southeastern region of Brazil: Environmental isolation and phylogeny. TRANSBOUNDARY AND EMERGING DISEASES, v. 69, n. 3, p. 8-pg., 2021-06-10. (18/08009-0, 18/17596-7)