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Novas abordagens visando diagnóstico rápido e diferencial da pitiose equina

Processo: 18/08009-0
Modalidade de apoio:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de agosto de 2018 - 31 de julho de 2020
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
Pesquisador responsável:Sandra de Moraes Gimenes Bosco
Beneficiário:Sandra de Moraes Gimenes Bosco
Instituição Sede: Instituto de Biociências (IBB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
Pesquisadores associados:Giselle Souza da Paz ; João Pessoa Araújo Junior ; José Cavalcante Souza Vieira ; Lucilene Delazari dos Santos ; Marília Afonso Rabelo Buzalaf
Assunto(s):Proteínas  Micologia médica  Pitiose 
Palavra(s)-Chave do Pesquisador:imunoproteômica | lesão granulomatosa | pitiose | Proteinas | qPCR-HRM | Micologia Médica

Resumo

Causada pelo oomiceto Pythium insidiosum, a pitiose é uma doença emergente que ocorre em países de clima tropical e subtropical acometendo principalmente equinos, cães e humanos. A doença é de difícil diagnóstico, e frequentemente confundida com outras enfermidades que desenvolvem lesões granulomatosas em equinos. O tratamento da pitiose também é difícil, uma vez que, por ser um oomiceto, o patógeno não responde satisfatoriamente aos fármacos antifúngicos disponíveis devido à ausência de ergosterol na membrana plasmática, necessitando de procedimentos cirúrgicos. Desta forma, propomos a padronização e validação da técnica de qPCR e qPCR-HRM para o diagnóstico precoce e diferencial entre as lesões granulomatosas causadas por P. insidiosum e/ou fungos zigomicetos. Nas amostras que resultarem-se negativas para pitiose e/ou zigomicose, será realizado diagnóstico diferencial para habronemose e sarcóide equino. Para o desenvolvimento dessa etapa do estudo será padronizada uma qPCR para o diagnóstico específico de P. insidiosum utilizando os primers Pi1 e Pi2 derivados da região ITS1 do rDNA. Para a realização de um diagnóstico rápido e diferencial será implementada a qPCR-HRM para a diferenciação molecular de P. insidiosum e fungos zigomicetos, utilizando primers oriundos da região 18S do rRNA. As amostras negativas na qPCR-HRM serão submetidas a análise molecular para Habronema spp. e Papilomavírus bovino 1, 2 e 13 (agentes etiológicos de sarcóide equino), principais diagnósticos diferenciais de pitiose em equinos. Além disso, também será realizada a caracterização de proteínas totais deste oomiceto, bem como a avaliação da(s) proteína(s) imunodominante(s) de P. insidosum na pitiose equina, utilizando-se técnicas analíticas, tais como eletroforese bidimensional, Western blot, espectrometria de massas e bioinformática. A partir da caracterização da(s) proteína(s) imunodominante(s) é esperada a identificação de antígeno(s) do patógeno, o(s) qual(is) poderá(ão) auxiliar no diagnóstico da pitiose equina, bem como no desenvolvimento de um novo imunoterápico visando seu tratamento. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DA PAZ, GISELLE SOUZA; CAMARGO, GABRIEL GASPARINI; CURY, JOSE EDUARDO; APOLONIO, EMANUEL VITOR PEREIRA; GARCES, HANS GARCIA; DO PRADO, ANA CAROLINA; CHECHI, JESSICA LUANA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; WATANABE, MARCOS JUN; BAGAGLI, EDUARDO; et al. Outbreak of equine pythiosis in a southeastern region of Brazil: Environmental isolation and phylogeny. TRANSBOUNDARY AND EMERGING DISEASES, . (18/08009-0, 18/17596-7)
DA PAZ, GISELLE SOUZA; CAMARGO, GABRIEL GASPARINI; CURY, JOSE EDUARDO; APOLONIO, EMANUEL VITOR PEREIRA; GARCES, HANS GARCIA; DO PRADO, ANA CAROLINA; CHECHI, JESSICA LUANA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; WATANABE, MARCOS JUN; BAGAGLI, EDUARDO; et al. Outbreak of equine pythiosis in a southeastern region of Brazil: Environmental isolation and phylogeny. TRANSBOUNDARY AND EMERGING DISEASES, v. 69, n. 3, p. 8-pg., . (18/08009-0, 18/17596-7)
CHECHI, JESSICA LUANA; ROTCHANAPREEDA, TIWA; DA PAZ, GISELLE SOUZA; PRADO, ANA CAROLINA; OLIVEIRA, ALANA LUCENA; SOUZA VIEIRA, JOSE CAVALCANTE; RABELO BUZALAF, MARILIA AFONSO; RODRIGUES, ANDERSON MESSIAS; DELAZARI DOS SANTOS, LUCILENE; KRAJAEJUN, THEERAPONG; et al. Prospecting Biomarkers for Diagnostic and Therapeutic Approaches in Pythiosis. JOURNAL OF FUNGI, v. 7, n. 6, . (16/10804-8, 19/08761-7, 18/08009-0)

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