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Desenvolvimento de uma Multiplex-Nested-RT-PCR para a detecção simultânea de cinco RNA vírus associados a infecções congênitas

Processo: 17/26543-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de julho de 2018 - 30 de junho de 2020
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
Pesquisador responsável:Thelma Suely Okay
Beneficiário:Thelma Suely Okay
Instituição-sede: Instituto de Medicina Tropical de São Paulo (IMT). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Pesq. associados:Kelly Aparecida Kanunfre
Assunto(s):Técnicas de diagnóstico molecular  Perinatologia  Mortalidade perinatal 

Resumo

O objetivo desta proposta é desenvolver uma multiplex-nested-RT-PCR capaz de detectar de forma simultânea cinco RNA vírus associados a infecções congênitas: vírus da rubéola, enterovírus (poliovírus, echovírus, coxckasie vírus, outros enterovírus não classificados), além de três arbovírus (dengue, chikungunya e zika), por meio de amplificações do tipo multiplex-nested-RT-PCR, confirmadas pela amplificação quantitativa apenas do patógeno evidenciado no teste combinado. Os casos positivos serão sequenciados e comparados a protótipos do GenBank. Em nosso laboratório, uma multiplex-nested-PCR capaz de detectar sete patógenos que contêm DNA no genoma e associados a infecções congênitas (Toxoplasma gondii, CMV, HSV, EBV, VZV, parvovírus B19 e adenovírus) foi desenvolvida e após a análise de 357 amostras clínicas provenientes de casos suspeitos (n=161) e casos sem suspeita de infecção (n=196), totalizando 357 casos, a multiplex-nested-PCR detectou 60 casos positivos em 161 suspeitos (37,3%) contrastando com os 13 casos (8%) diagnosticados pelos exames disponíveis nos dois centros obstétricos participantes, 4,7 vezes menos casos. A presente proposta pretende aproveitar a experiência adquirida pelo grupo para desenvolver uma segunda ferramenta molecular, mais complexa, que deverá, juntamente com a primeira, possibilitar a detecção de 12 patógenos, aumentando significativamente os diagnósticos no pré-natal, propiciando tratamento em alguns casos, e seguimento mais amiúde de todas as gestações nas quais infecções foram diagnosticadas. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RENTE FERREIRA FILHO, JULIO CESAR; ALMEIDA BRAZ, LUCIA MARIA; ALVES ANDRINO, MARCOS LUIZ; YAMAMOTOA, LIDIA; KANUNFREA, KELLY APARECIDA; OKAYA, THELMA SUELY. Mitochondrial and satellite real time-PCR for detecting T. cruzi DTU II strain in blood and organs of experimentally infected mice presenting different levels of parasite load. Experimental Parasitology, v. 200, p. 13-15, MAY 2019. Citações Web of Science: 0.

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