Estudo do efeito da colite ulcerativa experimental no sistema nervoso entérico de camundongos deficientes do receptor P2X7 (P2X7-/-)

• Processo: 18/07862-1
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2021
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Anatomia
• Pesquisador responsável: Patricia Castelucci
• Beneficiário: Patricia Castelucci
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Colite ulcerativa Sistema nervoso entérico Receptores purinérgicos P2X7
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: camundongo deficiente receptor P2X7 | Colite ulcerativa | Plexo mioentérico | receptor P2X7 | sistema nervoso entérico

Resumo

O 5'-adenosina trifosfato (ATP) é conhecido como um neurotransmissor e seus receptores são os da família P2X1-7. Foi demonstrada a presença de receptor purinérgico P2X2, 3, 7 no sistema nervoso entérico. A colite ulcerativa e a Doença de Crohn apresentam processos patofisiológicos, tais como: a necrose do intestino e atingem os neurônios entéricos e glias entéricas. Tem sido demonstrada a participação do receptor P2X7 no processo inflamatório e necrose de células. Este projeto visa estudar o papel do receptor P2X7 no plexo mioentérico e célula glial entérica na colite ulcerativa de camundongos deficientes para o receptor P2X7 (P2X7-/-, KO). Para isto, serão injetados 2, 4, 6, ácido trinitrobenzeno sulfônico (TNBS) no intestino grosso de camundongos C57BL/6 e P2X7-/- (KO) e, no grupo Sham será injetado veículo. Os grupos serão: WT/Sham, WT/Colite, KO/Sham e KO/Colite. Serão utilizados cinco animais para cada grupo e por técnica, sendo usado o total de 60 animais. Serão analisados: a) a colocalização do receptor P2X7 com óxido nítrico sintase (NOS), colina acetil transferase (ChAT), pan neuronal (PGP9.5) e células gliais entéricas imunorreativas a S100² ou ao GFAP; b) neurônio ou glia por gânglio (célula/gânglio) e área do perfil celular (¼m2) dos neurônios imunorreativos ao receptor P2X7, NOS, ChAT, PGP9.5 e glias entéricas; c) a histologia do colo distal; d) a motilidade intestinal; e) a presença de citocinas inflamatórias; f) as vias de sinalização das MAPK: ERK-1/2, p38 MAPK e da caspase-3; g) as expressões proteicas e gênicas do receptor P2X7. Para tanto, serão usadas técnicas de duplas e triplas marcações de imunofluorescência, as análises qualitativas e quantitativas serão obtidas dos microscópios da fluorescência e de Confocal de Varredura a Laser. Para a averiguação da motilidade intestinal será usado o sistema de banho de órgãos, para o estudo das citocinas será utilizado o métodos de Elisa e para a análise morfológica será usado o método de histologia convencional. Para o estudo das vias de sinalização e de expressão proteica e gênica será usado Western Blotting e PCR-RT, respectivamente. Após, serão feitas análises estatísticas. O projeto tem a justificativa de elucidar as classes neuronais afetadas em modelo de inflamação intestinal, em animais deficientes para o gene P2X7-/- e verificar os potenciais alvos terapêuticos. (AU)

Publicações científicas

(8)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SANTOS, ANA A. Q. A.; COSTA, DEIZIANE V. S.; FOSCHETTI, DANIELLE A.; DUARTE, ANTONIELLA S. G.; MARTINS, CONCEICAO S.; SOARES, PEDRO M. G.; CASTELUCCI, PATRICIA; BRITO, GERLY A. C.. P2X7 receptor blockade decreases inflammation, apoptosis, and enteric neuron loss during Clostridioides difficile toxin A-induced ileitis in mice. WORLD JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY, v. 28, n. 30, p. 14-pg., 2022-08-14. (14/25927-2, 18/07862-1)

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MAGALHAES, HENRIQUE INHAUSER RICETI; MACHADO, FELIPE ALEXANDRE; SOUZA, ROBERTA FIGUEIROA; CAETANO, MARCOS ANTONIO FERREIRA; FIGLIUOLO, VANESSA RIBEIRO; COUTINHO-SILVA, ROBSON; CASTELUCCI, PATRICIA. Study of the roles of caspase-3 and nuclear factor kappa B in myenteric neurons in a P2X7 receptor knockout mouse model of ulcerative colitis. WORLD JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY, v. 29, n. 22, p. 29-pg., 2023-06-14. (18/07862-1, 14/25927-2)

MACHADO, FELIPE ALEXANDRE; SOUZA, ROBERTA FIGUEIROA; FIGLIUOLO, VANESSA RIBEIRO; COUTINHO-SILVA, ROBSON; CASTELUCCI, PATRICIA. Effects of experimental ulcerative colitis on myenteric neurons in P2X7-knockout mice. Histochemistry and Cell Biology, v. 160, n. 4, p. 19-pg., 2023-06-12. (18/07862-1, 14/25927-2)