Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica

• Processo: 18/13739-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2025
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Celular
• Pesquisador responsável: Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
• Beneficiário: Thaís Larissa Araujo de Oliveira Silva
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Francisco Rafael Martins Laurindo ; Gabriela Chiosis ; Julianna Dias Zeidler ; Julio Cesar Borges ; William Salibe Filho
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/20224-5 - Padronização de BONCAT acoplado a PLA em células endoteliais primárias., BP.TT; 23/06938-2 - Padronização de BONCAT acoplado a PLA em células endoteliais primárias., BP.TT; 21/05361-8 - Efeitos do silenciamento da HSC70 e HSP70 na resposta das células endoteliais em resposta à força hemodinâmica, BP.IC; + mais bolsas vinculadas 20/11249-3 - A fisiopatologia das células endoteliais isoladas de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo: mecanismos regulados por HSP70, BP.MS; 19/25503-1 - Mecanismo de formação e estabilidade dos complexos macromolecular de Hsp70 e Hsp90 em células endoteliais, BP.IC; 19/20435-8 - Proteostase mediada pela chaperona molecular HSP70 em células endoteliais em resposta à força hemodinâmica, BP.JP - menos bolsas vinculadas
• Assunto(s): Biologia celular Chaperonas moleculares Proteínas de choque térmico HSP70 Dobramento de proteína Tromboembolismo Proteostase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biologia vascular | Chaperonas moleculares | enovelamento proteico | Hsp70 | shear stress | tromboembolismo pulmonar hipertensivo | Biologia Celular

Resumo

A chaperona molecular HSP70 é o membro mais abundante do chaperoma. No contexto vascular, as únicas proteínas clientes da HSP70 conhecidas em células endoteliais (ECs) são nucleolina e CLEC14a, proteínas envolvidas na angiogênese associada ao tumor. Experimentos de perda de função em ECs em condições estáticas promoveram efeitos gerais como inibição da migração, formação de tubo e fosforilação da eNOS e AKT em resposta a VEGF. No vaso, a principal força hemodinâmica que controla o fenótipo endotelial é a força de cisalhamento ou shear stress. Neste contexto, a quantificação da fração e identidade das proteínas que necessitam da HSP70 para alcançar o estado nativo permitirá aprofundar o entendimento das bases moleculares da fisiologia vascular. Neste projeto os objetivos são: (1) identificar clientes da HSP70 em ECs submetidas a fluxo laminar e turbulento através da adaptação original da técnica de BONCAT (marcação com aminoácido não canônico biortogonal) seguida de imunoprecipitação da HSP70 e espectometria de massa, (2) avaliar a formação de complexos de alto peso molecular com gel Nativo e o seu isolamento através de pull down com YK5-biotin, (3) como modelo de doença e de perda de função da HSP70, utilizaremos as ECs primárias isoladas da artéria pulmonar de pacientes com tromboembolismo pulmonar hipertensivo (TEPH). Descobrimos por imuno-histoquímica que há redução significativa na marcação da HSP70 no tecido adjacente ao trombo e que as ECs isoladas de pacientes com TPEH quando submetidas a shear stress de alta magnitude (patológico na artéria pulmonar) apresentam baixo nível de expressão da HSP70 confirmando estas células como excelente modelo. Esse resultado levanta a hipótese de que um estresso crônico como shear stress regula o proteoma resultando em disfunção endotelial. A análise longitudinal temporal e comparativa de shear stress fisiológico e patológico fornecerá visão mecanística do enovelamento proteico mediada pela HSP70, com potencial identificação de alvos moleculares. Estas descobertas devem contribuir para avanços conceituais e implicações fisiopatológicas da HSC/P70 na resposta da célula endotelial à força hemodinâmica. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

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ALVES, LIVIA A.; NAVEED, HASSAN; FRANCO, EDUARDO M.; GARCIA, MAIRA TERRA; FREITAS, VICTOR A.; JUNQUEIRA, JULIANA C.; BASTOS, DEBORA C.; ARAUJO, THAIS L. S.; CHEN, TSUTE; MATTOS-GRANER, RENATA O.. PepO and CppA modulate Streptococcus sanguinis susceptibility to complement immunity and virulence. VIRULENCE, v. 14, n. 1, p. 16-pg., 2023-12-31. (17/19899-4, 19/20435-8, 18/12248-0, 18/02054-4, 18/13739-8, 21/13074-9)