Atividade antiviral de nanoemulsão de curcumina associa a terapia fotodinâmica em células de carcinoma de vulva transduzidas com diferentes variantes de HPV-16

• Processo: 20/02173-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2020
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2020
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Marilia de Freitas Calmon
• Beneficiário: Marilia de Freitas Calmon
• Instituição Sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Linhagem celular Terapia fotodinâmica Virologia Nanoemulsão
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: carcinoma de vulva | Hpv-16 | Linhagem Celular | Nanoemulsão | Terapia Fotodinâmica | virologia

Resumo

A neoplasia intraepitelial vulvar (NIV) está associada à infecção pelo papilomavírus humano (HPV). A curcumina é um composto bioativo natural com propriedades antineoplásicas. O uso de nanopartículas contendo curcumina poderia permitir um melhor desempenho desse composto em terapias. Assim, as biópsias do VIN foram coletadas e a detecção do DNA do HPV foi realizada por PCR, as amostras positivas foram genotipadas pelo polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP) e as variantes do HPV-16 foram determinadas por sequenciamento. As células de carcinoma da vulva positivo para HPV-16 (A431) foram transduzidas com as variantes E-P e E-350G HPV-16 E6. A viabilidade das células transduzidas tratadas com nanoemulsões foi determinada pelo ensaio MTT. Além disso, a apoptose foi avaliada pela atividade enzimática da Caspase-3/7. O ensaio de viabilidade celular mostrou que tanto a nanoemulsão vazia (NE-V) quanto a nanoemulsão de curcumina (NE-CUR) tiveram pouco efeito na viabilidade celular em comparação às células controle. Além disso, observamos que as células irradiadas na presença de NE-CUR apresentaram 90% de morte celular. O ensaio de apoptose revelou ainda um aumento significativo na atividade das caspases 3 e 7 nas células A431 que expressam ambas as variantes do HPV-16 E6 após o tratamento com NE-CUR. Finalmente, submetemos as células A431 transduzidas pelo HPV a culturas organotípicas e observamos que a combinação de tratamentos afetou a arquitetura tecidual com sinais evidentes de dano tecidual. Concluímos que as nanoemulsões atingem boa biocompatibilidade, uma vez que não foi observada citotoxicidade e o NE-CUR associado à fotoativação apresentou resultados promissores, levando à morte apenas em células sujeitas a irradiação. Esse sistema de administração de medicamentos associado à terapia fotodinâmica pode se tornar promissor no tratamento de lesões da vulva. (AU)