Biomarcadores de gravidade e prognóstico na COVID-19 de crianças e adolescentes com comorbidades: carga viral em sangue, saliva e fezes, ACE2 expresso e solúvel, apoptose via MCL-1

• Processo: 21/04280-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2023
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Thelma Suely Okay
• Beneficiário: Thelma Suely Okay
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Heloisa Helena de Sousa Marques ; Maria Fernanda Bádue Pereira
• Assunto(s): Crianças e adolescentes Infecções por Coronavirus SARS-CoV-2 COVID-19 Carga viral Marcadores prognósticos Proteína de sequência 1 de leucemia de células mieloides Expressão de proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Ace2 | biomarcadores | Covid-19 | Crianças e Adolescentes | Rt-Pcr | SARS-CoV-2 | Biologia Celular e Molecular

Resumo

Desde o início da pandemia de COVID-19, tem chamado atenção o fato de crianças e adolescentes apresentarem doença de menor gravidade, muito embora já tenham sido descritas infecções com elevadas cargas virais em secreções respiratórias de crianças assintomáticas, não existindo estudos sobre a presença do vírus no sangue (RNAemia) nessa faixa etária. SARS-CoV-2 possui elevada afinidade com os receptores da enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2) presentes em células epiteliais dos pulmões, intestinos, rins, coração, cérebro e epitélio dos vasos sanguíneos. Crianças parecem apresentar menor expressão de ACE2 em células epiteliais, de acordo com estudos de doenças cardiovasculares e endócrinas, oferecendo menos chances de ligação ao vírus SARS-COV-2 para penetrar nas células do hospedeiro, constituindo, possivelmente, um dos mecanismos envolvidos na menor gravidade da COVID-19 em crianças. Na presente proposta, pretendemos investigar a expressão de ACE2 em amostras fecais e salivares de crianças com COVID-19, apresentando ou não comorbidades, uma vez que esses materiais biológicos contêm células epiteliais descamadas, evitando-se a realização de biópsias de boca ou de intestinos. Além disso, os mesmos estudos mostraram que crianças apresentam níveis mais elevados de ACE2 solúvel na circulação em relação a adultos, promovendo uma competição entre o ACE2 circulante, que mantém ativo o sítio de ligação para SARS-CoV-2, fazendo com que uma parte dos vírus se ligue ao ACE2 circulante, resultando em menor quantidade de partículas virais entrando nas células do hospedeiro, constituindo outro possível mecanismo para explicar a menor gravidade da COVID-19 em crianças. Outro ponto que merece investigação na COVID-19 é a morte celular programada (apoptose), mais especificamente a via regulada pela MCL-1 (Myeloid Cell Leukemia-1). Em estudos de interações entre SARS-CoV-2 e o hospedeiro humano, a proteína MCL-1 humana foi o fator que sofreu a maior regulação positiva após contato com SARS-CoV-2. MCL-1 é codificada pelo gene mcl-1, que por sua vez sofre forte regulação transcricional (splicing alternativo), dando origem à isoforma longa (MCL-1L), com propriedades anti-apoptóticas, que predomina em situações fisiológicas. No entanto, em situações de inflamação/infecção/COVID-19, o splicing alternativo dará origem a duas isoformas curtas, a MCL-1S short e a MCL-1ES extra-short, que são pró-apoptóticas e se ligam especificamente à isoforma longa, inativando-a, consequentemente favorecendo a apoptose. Para controlar nossos experimentos de expressão, pretendemos estudar a tradução do gene CLl-1 por meio de suas concentrações séricas. Portanto, a presente pesquisa pretende avaliar dois grupos de pacientes (com ou sem COVID-19), posteriormente subdivididos em (com ou sem comorbidades), para: a) avaliar a carga viral de SARS-CoV-2 em sangue (RNAemia), saliva e fezes de crianças e adolescentes; b) avaliar a expressão do receptor ACE2 em células epiteliais de saliva e fezes; c) determinar os níveis circulantes de ACE2 solúvel; d) avaliar a expressão das três isoformas de MCL-1 no sangue; e) determinar as concentrações séricas de MCL-1 nos dois grupos. Os resultados dos parâmetros laboratoriais dos dois grupos com COVID-19 (apresentando ou não comorbidades) serão comparados, e aqueles que apresentarem diferenças estatisticamente significantes serão incluídos na regressão logística como variáveis independentes, tendo como variável dependente o desfecho das infecções (recuperação/óbito ou gravidade da COVID-19 - leve, moderada, grave). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DOS SANTOS, EMILLY HENRIQUE; BARREIRA, GABRIEL ACCA; YAMAMOTO, LIDIA; ROCHA, MUSSYA CISOTTO; RODRIGUES, KAREN ALESSANDRA; CRUZ, MARIA CAROLINA PIRES; KANUNFRE, KELLY APARECIDA; OKAY, THELMA SUELY. New Allele-Specific Oligonucleotide (ASO) amplifications for Toxoplasma gondii rop18 allele typing: Analysis of 86 human congenital infections in Brazil. Acta Tropica, v. 247, p. 8-pg., 2023-11-01. (21/04280-4)