Precipitação como método de purificação de anticorpos monoclonais e policlonais: determinação de parâmetros termodinâmicos e de processo

• Processo: 20/12552-1
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de março de 2022 - 29 de fevereiro de 2024
• Área do conhecimento: Engenharias - Engenharia Química - Operações Industriais e Equipamentos para Engenharia Química
• Pesquisador responsável: Igor Tadeu Lazzarotto Bresolin
• Beneficiário: Igor Tadeu Lazzarotto Bresolin
• Instituição-sede: Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas (ICAQF). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus Diadema. Diadema , SP, Brasil
• Pesq. associados: Fabiana Perrechil Bonsanto ; Gisele Atsuko Medeiros Hirata ; Iara Rocha Antunes Pereira Bresolin ; Luís Antonio Peroni ; Rafael Mauricio Matricarde Falleiro
• Bolsa(s) vinculada(s): 22/02807-8 - Produção de anticorpos monoclonais anti-IgG humana e sua purificação com precipitação, BP.TT; 22/03417-9 - Avaliação da precipitação como técnica de recuperação e purificação de anticorpos policlonais anti-IgM humana a partir de soro de coelhos, BP.TT
• Assunto(s): Purificação de proteínas Purificação de anticorpos Precipitação química Anticorpos monoclonais Processamento downstream

Resumo

Os anticorpos são biomoléculas que se tornaram fundamentais em diversas áreas de estudo, como a clínica e a diagnóstica por conta de sua habilidade em reconhecer moléculas presentes em uma mistura complexa. Para a etapa de purificação dos anticorpos, destaca-se a precipitação, que é baseada no princípio de redução da solubilidade de um soluto em um solvente, influenciado pela adição de algum agente precipitante, culminando na formação do precipitado no meio em estudo. Desta forma, este projeto tem como finalidade estudar o uso da técnica de precipitação para purificar anticorpos monoclonais (mAbs) e policlonais (pAbs) anti-IgG e anti-IgM, respectivamente. Os experimentos serão conduzidos utilizando polietilenoglicol e ZnCl2 como agentes precipitantes para estes anticorpos, determinando-se suas curvas de solubilidade e as condições mais promissoras para precipitação em batelada, bem como a otimização da etapa de ressuspensão. Após a ressuspensão, busca-se um anticorpo com pureza igual ou superior a 90%, em solução com viscosidade entre 1 e 3 mPa s. Por fim, os parâmetros termodinâmicos, constante de ligação (Ka), a estequiometria da reação (n), e as variações de entalpia (delta H), da energia livre (delta G) e de entropia (delta S) serão determinados por calorimetria, bem como o segundo coeficiente virial (B22), que representa o grau de interações intermoleculares em soluções diluídas. (AU)