Identificação e análise de proteínas enriquecidas na superfície de conídios do fungo patogênico humano Aspergillus fumigatus

• Processo: 23/07785-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Thaila Fernanda dos Reis
• Beneficiário: Thaila Fernanda dos Reis
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Gustavo Henrique Goldman
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/17586-2 - Identificação e análise de proteínas enriquecidas na superfície de conídios do fungo patogênico humano Aspergillus fumigatus, BP.JP
• Assunto(s): Aspergillus fumigatus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aspergillus fumigatus | Conídios | Proteínas de Superfície | seção Fumigati | Micologia Molecular

Resumo

A seção Fumigati é composta por espécies de Aspergillus com índice de patogenicidade variável. Dentro dessa seção, Aspergillus fumigatus, um patógeno oportunista, é responsável por cerca de 70% dos casos de aspergilose pulmonar invasiva (API) e apresenta os maiores índices de patogenicidade. Alguns dados demonstram que para A. fumigatus, a capacidade de crescer em altas temperaturas e em condições limitantes de nutrientes, além da habilidade de produzir metabólitos secundários, favorecem a patogenicidade e auxiliam a sobrevivência de patógeno no hospedeiro humano. A API é estabelecida após a inalação de propágulos infecciosos fúngicos produzidos assexuadamente por Aspergillus e denominados conídios. Esses propágulos são encontrados dispersos no ambiente e podem, eventualmente, ser inalados pelo hospedeiro humano. Em indivíduos saudáveis, os conídios são prontamente eliminados pelo sistema imune inato. Entretanto, em pacientes com disfunções imunes ou condições pulmonares preexistentes, a eliminação do conídio pode falhar culminando com o estabelecimento da API. Assim, os conídios são o primeiro ponto de contato entre o fungo e as células humanas (do epitélio pulmonar e do sistema imune) e, portanto, são extremamente importantes para a progressão (ou não) da doença. Ademais, a capacidade de produzir grandes quantidades de conídios parece ser um fator diferencial e crucial para o sucesso da infecção por A. fumigatus. Quanto à composição, a superfície dos conídios é composta principalmente por proteínas, açúcares e metabólitos secundários. Alguns trabalhos têm explorado a análise da composição sacarídica da superfície conidial. Entretanto, pouco se conhece acerca da composição proteica superficial dessas células. O atual projeto está embasado em um estudo prévio que determinou o conjunto de proteínas presentes exclusivamente na superfície de conídios de A. fumigatus, as quais foram identificadas de forma comparativa com outras 3 espécies de Aspergillus da sessão Fumigati, duas não frequentemente relacionadas a API (A. oerlinghausenensis e A. fischeri) e A. lentulus. De um total de 62 proteínas enriquecidas na superfície dos conídios de A. fumigatus, 42 tiveram seus respectivos genes deletados e, até o momento, essas cepas mutantes foram parcialmente caracterizadas in vitro e in vitro. A fim de expandir o conhecimento gerado anteriormente, a atual proposta irá se concentrar na análise proteômica da superfície dos conídios de A. fumigatus e A. fischeri executada através da metodologia de trypsin-shaving seguida de espectrometria de massas. Como diferencial, serão incluídas ao estudo 10 novas cepas fúngicas sendo 5 isolados clínicos de A. fumigatus e 5 cepas ambientais de A. fischeri. Os dados obtidos serão confrontados entre eles para identificar o conjunto de proteínas enriquecidas especificamente na superfície de conídios de isolados clínicos de A. fumigatus. Essa abordagem visa identificar peptídeos que constituem o conjunto de proteínas enriquecidas na superfície dos conídios de A. fumigatus e confirmar que esse conjunto de proteínas enriquecidas ocorre entre diversos isolados clínicos da espécie, e não apenas na cepa de referência utilizada nos ensaios executados anteriormente. (AU)