Alterações funcionais e moleculares de proteínas da membrana eritrocitária nas esferocitoses hereditárias e clonagem do gene da banda 3 em réptil Caiman crocodilus yacare (jacaré do Pantanal)

• Processo: 96/09825-5
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Vigência: 01 de abril de 1997 - 30 de setembro de 2001
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Sara Teresinha Olalla Saad
• Beneficiário: Sara Teresinha Olalla Saad
• Instituição-sede: Faculdade de Ciências Médicas (FCM). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Auxílios(s) vinculado(s): 00/04689-3 - Ankyrin mutations in hereditary spherocytosis might be not common in all populations., AR.EXT; 98/02687-1 - Cytoplasmic overexpression of p53 and p21 ras in megaloblastic anemia., AR.EXT; 97/10641-9 - Different rates of recombination among polymorphic short tandem repeats of the beta-globin gene cluster in beta-s chromosomes, AR.EXT; 97/10642-5 - 1) novel beta-spectrin variants associated with hereditary spherocytosis in brazil. 2) increased tyrosine phosphorylation of band 3 in autoimune hemolytic anemia./, AR.EXT
• Bolsa(s) vinculada(s): 00/03792-5 - Caracterizacao de interacoes do dominio citoplasmatico da banda 3 cardiaca humana (ae3) usando o ensaio duplo-hibrido., BP.PD; 99/11365-0 - Alterações funcionais e moleculares de proteínas da membrana eritrocitária nas esferocitoses hereditárias e clonagem do gene da banda 3 no réptil Caiman crocodilus yacare, BP.TT; 99/06850-7 - Caracterizacao molecular da banda tres repteis., BP.DR; + mais bolsas vinculadas 99/02055-8 - Medida da deformidade dos eritrócitos nas doenças do globulo vermelho através de pinça óptica, BP.DR; 97/03433-0 - Caracterizacao molecular da banda 3 de jacare (caiman crocodilus yacare)., BP.PD; 97/03434-7 - Aspectos funcionais e moleculares nas esferocitoses hereditárias e clonagem do gene da banda 3 no réptil Caiman crocodilus yacare, BP.TT - menos bolsas vinculadas
• Assunto(s): Esferocitose hereditária Anquirinas Espectrina Regulação da expressão gênica Mutação Polimorfismo genético

Resumo

O presente projeto tem o objetivo de investigar as alterações moleculares e regulação dos genes da banda 3, anquirina e beta-espectrina nas esferocitoses hereditárias em cerca de 50 pacientes cuja caracterização proteíca já foi realizada. Este estudo será levado a efeito através de rastreamento de mutações e polimorfismos em todos os genes mencionados, incluindo a região promotora dos genes da banda 3 e anquirina, uma vez que ambas podem estar envolvidas na fisiopatologia do defeito. Para detecção das alterações moleculares serão utilizadas as técnicas de SSCP e sequenciamento. A transcrição será avaliada por RT-PCR. Há grande possibilidade de detectarmos novas mutações nos promotores da anquirina ou banda 3 e, neste caso, realizaremos ensaios in vitro para caracterizar os efeitos da mutação na atividade do promotor, através de construções gênicas e ensaios de luciferase, e na ligação do promotor com fatores de transcrição, através de estudos de mibilidade do DNA em gel de poliacrilamida e footprinting. É também objetivo investigar as alterações renais de pacientes com esferocitose hereditária e deficiência de banda 3, uma vez que esta proteína também se expressa em células intercaladas de túbulo distal e ducto coletor, responsáveis pela reabsorção de bicarbonato e secreção ácida. Cabe ressaltar que, tanto a banda 3 eritrocitária como a renal são isoformas de um mesmo gene e que, devido a um promotor alternativo no intron 3, diferem quanto à transcrição, no rim, de um mrna, com ausência dos 3 primeiros exons. Os estudos renais serão realizados através de testes de acidificação urinária e obtenção de medidas de bicarbonatúria, pH urinário, acidez titulável e excreção de amônia basais e após estímulo com furosemida. Estudaremos também o contratransporte de sódio e lítio em hemácias de pacientes com esferocitose hereditária, uma vez que este estudo é uma medida indireta do contratransporte Na+/H+, também envolvido na homeostase ácido-básico eritrocitária e possivelmente renal. Finalmente realizaremos a clonagem do cDNA da banda 3 no réptil Caiman crocodillus yacare com o objetivo de obtenção da sequência de aminoácidos, uma vez que a homeostase ácido-básica destas espécies difere da do homem, principalmente no que se refere à troca de Cl-/HCO3-. (AU)