Análise molecular da calcineurina em fungos patogênicos humanos

• Processo: 06/52593-1
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Temático
• Vigência: 01 de março de 2007 - 30 de junho de 2009
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Gustavo Henrique Goldman
• Beneficiário: Gustavo Henrique Goldman
• Instituição-sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 08/58626-4 - Identificação e caracterização de novos genes em Aspergillus nidulans envolvidos na transdução de sinal pela calcineurina, BP.PD; 08/03838-7 - Análise molecular da calcineurina em fungos patogênicos humanos, BP.TT; 08/03839-3 - Análise molecular da calcineurina em fungos patogênicos humanos, BP.TT; + mais bolsas vinculadas 07/57050-9 - Sequenciamento de DNA na plataforma ABI Prism 3130 | São Paulo - SP, BP.PC; 07/50690-2 - Identificação de genes que atuam na via metabólica da calcineurina nos fungos patogênicos humanos Aspergillus fumigatus e Paracoccidioides Brasiliensis, BP.PD; 06/59392-1 - Caracterização funcional dos homólogos pho80 e PHO85 no fungo patogênico humano Aspergillus fumigatus, BP.MS; 06/50668-4 - Construção e caraterização fenotípica de mutantes Crz1 e ALG-2 de Aspergillus fumigatus, BP.PD - menos bolsas vinculadas
• Assunto(s): Cálcio Aspergillus fumigatus Paracoccidioides brasiliensis
• Publicação FAPESP: http://www.fapesp.br/tematicos/saude_goldman.pdf

Resumo

O sensoreamento ambiental e a aquisição de nutrientes essenciais do ambiente são características metabólicas que estão associadas com o crescimento de P.brasiliensis e A.fumigatus num ambiente hostil, tal como o hospedeiro humano. O cálcio é um mensageiro secundário ubíquo que funciona em vias de transdução de sinais em organismos eucarióticos. A sinalização por cálcio é importante para diversos processos celulares, incluindo fertilização e desenvolvimento, exocitose, contração muscular, motilidade, quimiotaxia, divisão celular, diferenciação, morte celular programada e remodelagem da cromatina em organismos multicelulares eucarióticos. O nosso projeto propõe o estudo do sistema de regulação da fosfatase calcineurina em dois fungos patogênicos humanos P.brasiliensis e A.fumigatus, e a relação deste sistema com dois aspectos essenciais da virulência/patogenicidade destes organismos: 1) a transição dimórfica micélio-Ievedura em P.brasiliensis e 2) o sensoreamento do ambiente do hospedeiro humano e a aquisição de nutrientes em A.fumigatus. Nos últimos quatro anos, o nosso grupo tem trabalhado ativamente com ambos os fungos patogênicos, desenvolvendo uma série de recursos e ferramentas para o esclarecimento dos mecanismos de virulência/patogenicidade nesses organismos. Assim, os principais objetivos deste projeto são: 1) a análise da expressão gênica por microarrays da transição micélio-Ievedura em P.brasiliensis; 2) a identificação através do sistema duplo-híbrido de leveduras de cDNAs que correspondem a genes que codificam proteínas de P.brasiliensis que interagem com a calcineurina durante a transição micélio-Ievedura; 3) a construção de um vetor de transformação e inibição por RNAi; 4) a caracterização molecular do gene de A.fumigatus que codifica o homólogo do fator de transcrição Crz1 (CrzA) que é transportado para o núcleo após ser defosforilado pela calcineurina; 5) a identificação de genes que suprimam a ausência de calA e crzA de A.fumigatus por alto número de cópias e a análise da expressão gênica por microarrays do tipo selvagem e dos mutantes calA e crzA em diferentes condições de estresse; 6) a caracterização de genes envolvidos na utilização de fosfato inorgânico em A.fumigatus e a sua relação com calA e crzA mutantes e 7) a caracterização molecular de genes de A.fumigatus que codificam proteínas com domínios de ligação ao cálcio (EFhands). (AU)