Modulacao da expressao do gene ras e da apoptose pela radiacao gama 3-aminobenzamida e interferon gama.

• Processo: 97/12939-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 1998
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2000
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Elza Tiemi Sakamoto Hojo
• Beneficiário: Elza Tiemi Sakamoto Hojo
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Radiação ionizante Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Oncogene`Ras | Radiacao Ionizante

Resumo

A exposição das células ou dos organismos à radiação ionizante induz lesões no DNA que acionam vários mecanismos de defesa envolvendo complexos processos metabólicos e de transdução de sinais. Como resultado, a expressão de vários genes pode ser alterada, sendo que alguns proto-oncogenes podem ser afetados e esse efeito também tem sido correlacionado com o processo de apoptose. Há evidências de que a expressão do oncogene ras se correlaciona com o processo de inibição do processo apoptótico. O objetivo geral do presente projeto é estudar os efeitos de vários níveis de exposição às radiações-γ sobre a expressão do RNAm ras, paralelamente à detecção e quantificação de células apoptóticas. Serão realizados experimentos in vitro com as linhagens de células normais e transfectadas com o oncogene ras (Clone B61), bem como ensaios in vivo em camundongos inoculados com as células B61, comparando-se os resultados entre diferentes tecidos (medula óssea, fígado e baço) para a verificação de possíveis diferenças na radio sensibilidade celular. Em ambos os casos, os efeitos serão avaliados em termos de detecção e quantificação relativa de RNAm por Northern e dot blot, a fim de se estimar a repressão ou indução gênica pela radiação, relacionando-a com a incidência de morte celular programada, avaliada por análise de fragmentação do DNA (detecção de efeito qualitativo) e por coloração in situ com corantes fluorescentes (detecção de efeito quantitativo). Esta última possibilita identificar as células normais das necróticas e apoptóticas, além de quantificá-las. Outra parte do projeto tem como objetivo o estudo da modulação da expressão do gene ras e do processo de apoptose pelo inibidor de poli (ADP) ribose polimerize, a 3-aminobenzamida (3-AB) /em células irradiadas. Da mesma forma, será também testado o efeito do interferon-γ na modulação da resposta celular à indução de dano no DNA pela radiação ionizante. Em ambos os casos, serão realizados experimentos in vitro com as mesmas linhagens celulares mencionadas anteriormente e com a aplicação de protocolos semelhantes. Adicionalmente, quanto ao trabalho com o interferon como agente modulador, serão também realizados experimentos para a análise cito genética, (convencional e por hibridação in situ fluorescente, FISH), visando correlacionar à indução de alterações cromossômicas (rearranjos principalmente, detectados por FISH) com as possíveis alterações na expressão gênica e no processo de apoptose, 4 a fim de se estabelecer os limiares entre os mesmos e os níveis de dose de radiação capazes de provocar cada uma das respostas estudadas. Em tais ensaios para a análise das alterações cromossômicas serão também utilizadas linhagens de fibroblastos normais e linfócitos humanos em cultura, para melhor caracterizar os efeitos. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PEITL‚ P.; MELLO‚ S.S.; CAMPAROTO‚ M.L.; PASSOS‚ G.A.S.; HANDE‚ M.P.; CARDOSO‚ R.S.; SAKAMOTO-HOJO‚ E.T.. Chromosomal rearrangements involving telomeric DNA sequences in Balb/3T3 cells transfected with the Ha-ras oncogene. MUTAGENESIS, v. 17, n. 1, p. 67-72, 2002. (97/12939-5)