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Análise da regeneração da medula espinhal após enxertos de nervos ou inoculação de células de Schwann em presença do fator neurotrófico derivado de células gliais (GDNF)

Processo: 99/01319-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de julho de 1999 - 31 de agosto de 2002
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Pesquisador responsável:Gerson Chadi
Beneficiário:Gerson Chadi
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Imuno-histoquímica  Regeneração nervosa  Medula espinhal  Fator neurotrófico derivado de linhagem de célula glial  Astrócitos  Células de Schwann  Cultura de células 

Resumo

Ratos jovens serão submetidos à hemitransecção da medula espinhal ao nível torácico inferior. Segmentos de nervos intercostais do mesmo animal serão enxertados ou células de Schwann cultivadas de ratos neonatos serão inoculadas no espaço deixado pela lesão. O fator neurotrófico derivado de células gliais (GDNF) será continuamente infundido próximo ao local da ferida por um período de 7 dias, com o auxílio de uma mini-bomba osmótica. Os animais serão submetidos a 6 tomadas, com intervalos de 15 dias, de análise comportamental computadorizada onde parâmetros de locomoção, salto e movimentos serão registrados. Um grupo de animais receberá injeção do traçador neuronal retrógrado fluoro-gold na região do corno anterior da medula espinhal ipsilateral à lesão e distal a ela. Após 90 dias do término da infusão do fator neurotrófico os animais serão sacrificados e os seus cérebros e medula espinhal preparados para a análise quantitativa imunohistoquímica. Fibras nervosas marcadas pela imunorreatividade do neurofilamento e pela proteína associada à micro túbulos (MAP2) serão acompanhadas por segmentos medulares proximais a distais à lesão, incluindo a área do enxerto. A presença da bainha de mielina nas fibras nervosas regeneradas será analisada pela marcação imunohistoquímica dupla do neurofilamento e proteína básica de mielina, utilizando-se cromógenos diferentes. O estado de atividade do astrócito e da microglia será observado pela imunohistoquímica da proteína fibrilar ácida glial (GFAP) e OX 42, respectivamente. A expressão celular do fator básico de crescimento de fibroblastos (bFGF) será também analisada por esta técnica. Os preparados serão quantificados por dois métodos distintos: o número, a quantidade dos prolongamentos e o volume dos perfis celulares imunorreativos serão conseguidos pelo método estereológico de quantificação de partículas na terceira dimensão e a intensidade das imunomarcações será quantificada pela análise microdensitométrica de imagem. (AU)

Publicações científicas (15)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RAMOS ANDRADE, MICHELE SCHULTZ; MENDONCA, LUCIO MARIO; CHADI, GERSON. Treadmill running protects spinal cord contusion from secondary degeneration. Brain Research, v. 1346, p. 266-278, JUL 30 2010. Citações Web of Science: 12.
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GOMIDE, VANIA C.; LAUREANO, MAURA R.; SILVEIRA, GILCELIO A.; CHADI, GERSON. Neuropeptide Y in Rat Spiral Ganglion Neurons and Inner Hair Cells of Organ of Corti and Effects of a Nontraumatic Acoustic Stimulation. International Journal of Neuroscience, v. 119, n. 4, p. 508-530, 2009. Citações Web of Science: 3.
GUZEN, FAUSTO PIERDONA; DE ALMEIDA LEME, RICARDO JOSE; RAMOS DE ANDRADE, MICHELE SCHULTZ; DE LUCA, BIANCA APARECIDA; CHADI, GERSON. Glial cell line-derived neurotrophic factor added to a sciatic nerve fragment grafted in a spinal cord gap ameliorates motor impairments in rats and increases local axonal growth. RESTORATIVE NEUROLOGY AND NEUROSCIENCE, v. 27, n. 1, p. 1-16, 2009. Citações Web of Science: 21.
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JOÃO GABRIEL MARTINS DALLO; BERNARDO VERGARA REICHERT; JOSÉ BENEDITO RAMOS VALLADÃO JÚNIOR; CAMILA SILVA; BIANCA APARECIDA DE LUCA; BEATRIZ DE FREITAS AZEVEDO LEVY; GERSON CHADI. Differential astroglial responses in the spinal cord of rats submitted to a sciatic nerve double crush treated with local injection of cultured Schwann cell suspension or lesioned spinal cord extract: implications on cell therapy for nerve repair. Acta Cirurgica Brasileira, v. 22, n. 6, p. 485-494, Dez. 2007.
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RICARDO JOSÉ DE ALMEIDA LEME; GERSON CHADI. Distant microglial and astroglial activation secondary to experimental spinal cord lesion. Arquivos de Neuro-Psiquiatria, v. 59, n. 3A, p. 483-492, Set. 2001.

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