Resumo
Durante a transformação e progressão do carcinoma de mama a homeostase entre as células epiteliais e as estromais adjacentes se desregula e os fibroblastos tumorais apresentam várias propriedades alteradas tais como o potencial proliferativo e a produção de elementos da membrana basal. Em contrapartida o microambiente afeta a velocidade de crescimento do tumor, invasividade e capacidade de metástase. Os principais objetivos são, analisar o conjunto de genes modificados em fibroblastos e células tumorais envolvidas na interação tumor-estroma. O primeiro passo será obter fibroblastos de tumor de mama em estadiamentos diferentes por cultura ou dissecção a laser, extrair o RNA e pela técnica de SAGE determinar o perfil gênico individual destes diferentes fibroblastos. Genes diferencialmente expressos em relação a fibroblastos obtidos de mamoplastia serão selecionados e validados por PCR. O perfil cromossômico dos fibroblastos será obtido pela técnica da hibridização genômica comparativa (GCH). Para a verificação da sinalização heterotípica, co-culturas de fibroblastos de tumor e células mamárias normais ou vice-versa serão estabelecidas e após a separação destas células por beads específicos, o RNA será extraído, amplificado e colocado em lâminas de array fornecidas pelo Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer ou um número limitado de genes, identificado pela análise anterior de SAGE, será comparado por Real Time PCR. A transição epitélio-mesenquima será analisada retrospectivamente em um conjunto de blocos de parafina correspondendo vários estágios tumorais, através da técnica de imunohistoquímica, utilizando anticorpos conta algumas proteínas já conhecidas e outras advindas das análises anteriores. Dois outros aspectos serão investigados: 1) a regulação por estrógenos dos genes expressos em fibroblastos através da técnica de cultura de órgãos; 2) identificação no papel funcional de alguns genes diferencialmente expressos em células de câncer de mama antes e após a adesão a uma camada de laminina. (AU)
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