Sequenciamento, clonagem do cDNA da trombopoietina (TPO) canina avaliação do efeito biológico da TPO recombinante canina, padronização de um ELISA para a quantificação dos níveis séricos da trombopoietina e a avaliação da relação desses com o número de megacariócitos na medula óssea de cães trombocitopênicos

• Processo: 01/12797-3
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de março de 2002 - 30 de junho de 2006
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Clínica e Cirurgia Animal
• Pesquisador responsável: Regina Kiomi Takahira
• Beneficiário: Regina Kiomi Takahira
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Cães Citocinas Trombopoetina Megacariócitos Células da medula óssea Hemostasia DNA complementar Análise de sequência de DNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caes | Hemostasia | Plaqueta | Recombinante | Sequenciamento | Trmbopoietina

Resumo

A trombopoietina (TPO) canina é a citocina mais importante na regulação da formação plaquetária. A produção da TPO canina se dá principalmente no fígado, da mesma forma que nas outras espécies. O RNA mensageiro da TPO canina vai ser obtido de uma amostra de tecido hepática e a partir dessa amostra pela técnica do RT-PCR será obtido o DNA complementar (cDNA) total. A partir do uso de "primers" específicos obtidos a partir da literatura e comparados com a cadeia de aminoácidos da TPO do cão, o cDNA da TPO do cão será amplificado, sequenciado e clonado em vetores com alta capacidade de expressão, para a produção da trombopoietina recombinante canina (rcTPO). A partir da imunização de coelhos e cobaios com a rcTPO serão obtidos anticorpos anti-rcTPO cunícola e cobaio respectivamente, para a produção de uma ELISA com anticorpo de captura para a mensuração dos níveis séricos de TPO. A relação entre as concentrações de TPO no soro de cães e o número de megacariócitos na medula óssea será testada, bem como o efeito biológico e o potencial efeito imunogênico da rcTPO em cães. (AU)