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Melhoramento da termoestabilidade da glucoamilase de Aspergillus awamori pela técnica de PCR mutagênico, purificação e caracterização da enzima

Processo: 02/08355-8
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de novembro de 2004 - 31 de julho de 2007
Área do conhecimento:Ciências Agrárias - Ciência e Tecnologia de Alimentos - Ciência de Alimentos
Pesquisador responsável:Roberto da Silva
Beneficiário:Roberto da Silva
Instituição-sede: Instituto de Biociências, Letras e Ciências Exatas (IBILCE). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de São José do Rio Preto. São José do Rio Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Mutação  Glucana 1,4-alfa-glucosidase 

Resumo

A glucoamilase é uma proteína altamente glicosilada que catalisa a liberação hidrolítica da D-glucose a partir da extremidade não redutora do amido e olìgossacarídeos relacionados. A estabilidade da glucoamilase cai rapidamente em torno do 60°C. Uma glucoamilase mais estável, que poderia ser usada a temperaturas mais elevadas, é industrialmente desejável. Neste projeto, faremos mutagênesis aleatórias no gene da glucoamilase selvagem do Aspergillus awamori usando a técnica de PCR mutagênico para gerar quimeras com mutações no gene selvagem. Clones com esta função melhorada terão seus DNAs novamente mutagenizados em novos rounds e re-selecionados num total de 2-3 ciclos até desenvolver quimeras de colônias de levedura que irão produzir enzimas glucoamilase mutantes com a sua termoestabilidade melhorada quando comparadas com a selvagem. A termoestabilidade das enzimas brutas serão avaliadas por testes de inativação térmica seguidos de pelo teste de formação de halos em placas de amido. Depois a enzima será purificada para determinação da constante de inativação térmica, também será caracterizada bioquimicamente para verificação de efeito da mutação nas propriedades cinéticas da enzima. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE SOUZA, ANGELICA R.; DE ARAUJO, GABRIELA C.; ZANPHORLIN, LETICIA M.; RULLER, ROBERTO; FRANCO, FERNANDA C.; TORRES, FERNANDO A. G.; MERTENS, JEFFREY A.; BOWMAN, MICHAEL J.; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. Engineering increased thermostability in the GH-10 endo-1,4-beta-xylanase from Thermoascus aurantiacus CBMAI 756. International Journal of Biological Macromolecules, v. 93, n. A, p. 20-26, DEC 2016. Citações Web of Science: 9.
PAVEZZI, FABIANA CARINA; JACOMASSI CARNEIRO, ANDREIA A.; BOCCHINI-MARTINS, DANIELA ALONSO; ALVES-PRADO, HELOIZA FERREIRA; FERREIRA, HENRIQUE; MARTINS, PAULA M.; GOMES, ELENI; DA SILVA, ROBERTO. Influence of Different Substrates on the Production of a Mutant Thermostable Glucoamylase in Submerged Fermentation. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 163, n. 1, p. 14-24, JAN 2011. Citações Web of Science: 8.
LOPES GONCALVES, ALINE ZORZETTO; AZEVEDO CARVALHO, ANA FLAVIA; DA SILVA, ROBERTO; GOMES, ELENI. Localization and partial characterization of thermostable glucoamylase produced by newly isolated Thermomyces lanuginosus TO3 in submerged fermentation. Brazilian Archives of Biology and Technology, v. 51, n. 4, p. 857-865, JUL-AUG 2008. Citações Web of Science: 1.
ELENI GOMES; MARCELO ANDRÉS UMSZA GUEZ; NATALIA MARTIN; ROBERTO DA SILVA. Enzimas termoestáveis: fontes, produção e aplicação industrial. Química Nova, v. 30, n. 1, p. 136-145, Fev. 2007.

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