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Obtencao da fosfatase alcalina de culturas de osteoblastos:isolamento caracterizacao estrutural e cinetica da enzima e sua reconstituicao em sistemas vesiculares.

Processo: 03/06618-4
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de dezembro de 2003 - 30 de junho de 2006
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Pietro Ciancaglini
Beneficiário:Pietro Ciancaglini
Instituição-sede: Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
Assunto(s):Lipossomos  Purificação  Fosfatase alcalina  Cinética enzimática 

Resumo

A fosfatase alcalina, que se localiza nas membranas das vesículas da matriz extracelular, é requerida para o processo de mineralização de ossos e cartilagem. Recentes estudos de nosso laboratório permitiram a construção de sistemas vesiculares de fosfatase alcalina associada a lipossomos e células ghost resseladas, que podem mimetizar a função das vesículas que atuam naturalmente durante o processo de biomineralização, além de poderem ser empregadas no estudo do efeito dos fosfolipídios e da enzima tanto em sistemas in vitro quanto in vivo. Nesse projeto pretendemos desenvolver uma metodologia para a obtenção, solubilização e purificação da fosfatase alcalina empregando culturas de osteoblastos, além de sua caracterização cinética e incorporação em sistemas vesiculares. Devido às inúmeras vantagens do trabalho com culturas de células, em relação a metodologia anteriormente utilizada, será possível realizar os estudos de mineralização in vitro e in vivo trazendo um significativo avanço do conhecimento tanto do papel da enzima quanto do processo de biomineralização. (AU)