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Determinacao da especificidade catatilica de toxinas clostridiais (tetanica e butulinica a, e) atraves da utilizacao de substratos de fluorescencia apagada.

Processo: 04/00375-5
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de junho de 2004 - 31 de agosto de 2006
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
Pesquisador responsável:Ivo Lebrun
Beneficiário:Ivo Lebrun
Instituição-sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Clostridium  Toxinas  Meio de cultura  Atividade enzimática 

Resumo

A caracterização dos diversos componentes secretados durante o processo fermentativo auxilia na só no acompanhamento da formação do antígeno nas condições de cultivo; como também possibilita a quantificação dos compostos que podem ter utilidade do ponto de vista aplicativo. Algumas proteínas secretadas (como é o caso das toxinas clostridiais tetanica e botulinica) exibem atividade catalítica e, embora tenham sua atividade biológica caracterizada, são de difícil quantificação (são utilizados ensaios "in vivo" e o limite de floculaçao-Lf). Tentativas utilizando ensaios imunológicos (ELISA, TOBI-test) embora sensíveis não são capazes de determinar a atividade da toxina. O projeto pretende caracterizar a atividade catalítica das toxinas tetânica e botulínica A e E utilizando substratos peptídicos de fluorescência apagada, utilizando as seqüências naturais ou modificadas, definindo aspectos da especificidade catalítica. Além disso, após a definição dos melhores substratos, serão efetuadas quantificações nos lotes de produção, com o objetivo de se definir um método para a quantificação destas toxinas em ensaios de rotina. (AU)

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