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Controle da herança mitocondrial em embriões bovinos micromanipulados

Resumo

Desde o final dos anos 80, foram realizadas várias descobertas importantes, responsáveis pelo maior interesse científico em relação às mitocôndrias. Como exemplos, podemos citar a constatação de sua participação em doenças humanas e no processo de envelhecimento e de morte celular programada (apoptose). Existem vários modelos que procuram estabelecer a contribuição mitocondrial na produção e performance animal. Com o advento da técnica de transferência nuclear e de outras biotecnologias da reprodução, despertou-se interesse na herança mitocondrial de clones mamíferos e em humanos provenientes de oócitos submetidos à técnica de transferência de citoplasto. Esta técnica está sendo aplicada em casos de falha no desenvolvimento embrionário atribuída à deficiência citoplasmática oocitária, podendo resultar em heteroplasmia persistente nos indivíduos nascidos. Neste trabalho, aplicaremos a técnica de transferência de citoplasto em zigotos tratados com brometo de etídeo (EtBr) durante a maturação in vitro, visando verificar a influência da introdução de citoplasto não-tratado no desenvolvimento embrionário e a possibilidade de alteração da herança mitocondrial dos embriões obtidos, o que proporcionaria um modelo de estudo dos mecanismos moduladores desta herança, além de uma melhor compreensão dos efeitos dos componentes citoplasmáticos no desenvolvimento embrionário, fetal e pós-natal. Os resultados da utilização de um modelo animal para seleção citoplasmática serão importantes para a obtenção animais clonados de origem citoplasmática conhecida, visando-se estabelecer com maior precisão a participação do genoma mitocondrial na performance e produção animal de animais adultos. Numa primeira fase, visando-se estabelecer in vitro concentrações de EtBr que permitam o desenvolvimento embrionário e, ao mesmo tempo, interfiram no metabolismo mitocondrial, o tratamento com a droga será realizado durante o processo de maturação in vitro. Após realização da fertilização in vitro (FIV) será avaliada a taxa de desenvolvimento embrionário, número de núcleos em blastocistos, o potencial de membrana mitocondrial pela coloração com JC-1, bem como será realizado o ensaio cometa para avaliação do grau de apoptose apresentado pelos embriões. Na segunda fase, que envolverá a obtenção dos embriões heteroplásmicos, será realizada transferência de citoplasto B. indicus e B. taurus em zigotos B. taurus tratados ou não com EtBr durante o processo de maturação in vitro. Estes embriões serão avaliados quanto aos índices de heteroplasmia nos grupos controle e tratamentos utilizando-se a densitometria corrigida com os fluorocromos 6-FAM e TAMRA. Realizaremos também avaliação do potencial de membrana mitocondrial pela coloração com JC-1, avaliação da qualidade dos blastocistos por contagem do número de células e estimativa da ocorrência de apoptose pelo ensaio cometa. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
CHIARATTI, MARCOS ROBERTO; FERREIRA, CHRISTINA RAMIRES; PERECIN, FELIPE; MEO, SIMONE CRISTINA; SANGALLI, JULIANO RODRIGUES; MESQUITA, LIGIA GARCIA; DE CARVALHO BALIEIRO, JULIO CESAR; SMITH, LAWRENCE CHARLES; GARCIA, JOAQUIM MANSANO; MEIRELLES, FLAVIO VIEIRA. Ooplast-mediated developmental rescue of bovine oocytes exposed to ethidium bromide. Reproductive BioMedicine Online, v. 22, n. 2, p. 172-183, Feb. 2011. Citações Web of Science: 23.
FERREIRA, CHRISTINA RAMIRES; BURGSTALLER, JOERG PATRICK; PERECIN, FELIPE; GARCIA, JOAQUIM MANSANO; CHIARATTI, MARCOS ROBERTO; MEO, SIMONE CRISTINA; MUELLER, MATHIAS; SMITH, LAWRENCE CHARLES; MEIRELLES, FLAVIO VIEIRA; STEINBORN, RALF. Pronounced Segregation of Donor Mitochondria Introduced by Bovine Ooplasmic Transfer to the Female Germ-Line. BIOLOGY OF REPRODUCTION, v. 82, n. 3, p. 563-571, MAR 2010. Citações Web of Science: 32.
CHIARATTI, MARCOS ROBERTO; FERREIRA, CHRISTINA RAMIRES; MEIRELLES, FLAVIO VIEIRA; MEO, SIMONE CRISTINA; PERECIN, FELIPE; SMITH, LAWRENCE CHARLES; FERRAZ, MARCIO LEAO; DE SA FILHO, MANOEL FRANCISCO; GIMENES, LINDSAY UNNO; BARUSELLI, PIETRO SAMPAIO; GASPARRINI, BIANCA; GARCIA, JOAQUIM MANSANO. Xenooplasmic Transfer between Buffalo and Bovine Enables Development of Homoplasmic Offspring. CELLULAR REPROGRAMMING, v. 12, n. 3, p. 231-236, 2010. Citações Web of Science: 7.

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