Detecção da microbiota dos canais radiculares pela cultura microbiologica e biologia molecular-checkerboard DNA-DNA hybridization: análise histomicrobiologica, histopatológica e radiográfica do desenvolvimento da reação periapical crônica em dentes de cães

• Processo: 05/04599-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de junho de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2008
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Izabel Yoko Ito
• Beneficiário: Izabel Yoko Ito
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Município da Instituição Sede: Ribeirão Preto
• Assunto(s): Histopatologia animal Tecido periapical Lesões periapicais Canal radicular Microbiologia oral
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biologia Molecular | Endodntia | Lesao Periapical | Metodos De Inducao De Lesao | Microbiologia Endodontica | Microbiologia Endodôntica

Resumo

O tratamento endodôntico de dentes com lesão periapical apresenta menor índice de sucesso em função das inúmeras implicações microbiológicas e patológicas. O quadro infeccioso existente resulta de sucessivas alterações do ambiente da cavidade pulpar relativas à tensão de oxigênio, disponibilidade de nutrientes e trocas metabólicas dos microrganismos existentes. Durante o processo de desenvolvimento da lesão periapical ocorre mudança da microbiota endodôntica e propagação dos microrganismos para o sistema de canais radiculares, o que resulta em alterações inflamatórias e radiográficas da região periapical. Desta forma, o conhecimento do desenvolvimento da lesão periapical, correlacionando alterações microbiológicas, histopatológicas e radiográficas torna-se importante para elaboração das condutas do tratamento endodôntico de dentes com necrose pulpar. Neste estudo, será realizada avaliação microbiológica por meio das técnicas de cultura e biologia molecular, correlacionando os seus resultados com a análise histopatológica, histomicrobiológica e radiográfica do desenvolvimento da reação periapical crônica induzida em dentes de cães. Serão utilizados pré-molares de 4 cães, totalizando 80 raízes, os quais terão seus canais radiculares expostos ao meio bucal por 7 dias e posteriormente selados pelo período de 7 a 60 dias, determinando os quatro grupos experimentais: GI- 7 dias, GII- 15 dias, GIII- 30 dias e GIV- 60 dias, sendo todos os grupos realizados no mesmo animal em forma de rodízio. No período inicial de selamento e nos períodos experimentais serão realizadas radiografias padronizadas para avaliação radiográfica e colheita de material do canal radicular para identificação da microbiota endodôntica. A avaliação microbiológica será realizada pelos métodos de cultura, utilizando meios seletivos para microrganismos anaeróbios, aeróbios, Streptococcus sp., Staphylococcus sp. e aeróbios com pigmento negro, e pela técnica de biologia molecular - Checkerboard DNA-DNA hybridization, onde serão utilizadas sondas específicas para microrganismos do canal radicular. A análise dos resultados microbiológicos, possibilitará a avaliação da cinética das alterações da microbiota, além da compação das duas técnicas utilizadas quanto a identificação dos microrganismos. Os resultados microbiológicos serão correlacionados com as alterações histopatológicas, histomicrobiológicas e radiográficas. Após o período experimental e morte dos animais, será efetuada a análise das alterações radiográficas, histopatológicas, histomicrobiológicas dos tecidos apicais e periapicais ocorridas durante o processo de desenvolvimento da reação periapical crônica induzida nos diferentes períodos do estudo. A avaliação radiográfica será efetuada por meio da digitalização e mensuração da área radiolúcida da lesão periapical e comparação entre os períodos. Os cortes histológicos obtidos após processo de desmineralização serão corados pela Hematoxilina e Eosina para análise histopatológica e Brown e Breen para avaliação histomicrobiológica. A análise histopatológica será efetuada baseada nas alterações inflamatórias, e reabsorção dos tecidos apicais e periapicais. A avaliação histomicrobiológica visa a identificação da extensão da propagação dos microrganismos no sistema de canais radiculares. Os dados obtidos serão submetidos à análise estatística para comparação entre os grupos experimentais e correlação entre os diferentes parâmetros avaliados. (AU)