Resumo
Este projeto tem como meta explorar a interface entre os componentes da maquinaria de tradução e processamento de RNA visando estabelecer os mecanismos de controle da expressão gênica. O estudo destes mecanismos é essencial para se entender situações críticas por que a célula passa como, por exemplo, invasão celular por vírus e repostas a agentes de controle do crescimento, proliferação ou de indução à apoptose. A abordagem experimental envolve a caracterização funcional e estrutural, bem como o mapeamento das interações proteína-proteína e proteína-RNA, de fatores envolvidos na síntese da maquinaria de tradução, na maturação e tradução de RNAs específicos e nas vias de sinalização que controlam a expressão gênica. A proteína Nip7 está envolvida com o processamento de precursores de rRNA ribossomal, no entanto sua função molecular ainda não foi decifrada. Identificamos a interação entre Nip7 e a proteína SBDS, codificada pelo gene associado à Síndrome de Shwachman-Bodian-Diamond (SBDS). A principal hipótese neste caso é estabelecer se há uma relação entre defeitos no processamento de rRNA e síndrome de Shwachman-Bodian-Diamond. O processo de síntese de proteínas é regulado de várias formas sendo que a regulação envolve desde a estrutura do mRNA até modificações pós-traducionais dos fatores de tradução em resposta a sinais fisiológicos e ambientais. Dentre as proteínas em estudo no laboratório temos a ISG95 que é uma proteína humana cuja transcrição do seu mRNA é ativada por infecção pelos vírus da hepatite C (HCV) e vírus Vaccínia. A ativação da transcrição do mRNA da ISG95 também ocorre em resposta a tratamento com os interferons alfa e gama sendo que as vias dos interferons são sabidamente ativadas em resposta à infecção viral. ISG95 possui domínios conservados, encontrados em proteínas formadoras de cap de mRNA e os objetivos do seu estudo é determinar se possui atividade bioquímica de formação de cap e se a ativação de sua expressão tem efeito de proteção celular em relação infecção viral. A maioria dos vírus codifica em seu genoma as proteínas necessárias para sua replicação, mas dependem completamente da maquinaria celular para a síntese de suas proteínas. Os Flavivírus são mRNA de fita positiva diferindo dos mRNAs celulares por possuírem estruturas secundárias estáveis na sua região 3 não traduzida em vez de uma cauda de poli-adenina. Existe a hipótese de que estas estruturas secundárias desempenham papel análogo à cauda de poli-adenina. Identificamos em nosso laboratório a interação da proteína humana PACT com a região 3SL do vírus da Dengue. PACT é ativadora da quinase de proteína PKR, a qual fosforila o fator de tradução eIF2alfa levando a uma redução geral da síntese de proteínas. PKR, além de responder a tratamento com interferon, como a ISG95, está na via de reposta celular a infecção viral. As hipóteses a serem testadas no caso da interação PACT-RNA do vírus da dengue são determinar se a interação é específica e se PACT está na via de resposta celular a infecção pelo vírus da Dengue. Além e responder à infecção viral, a síntese de proteínas é regulada por vários agentes como o imunossupressor rapamicina, a qual também possui a capacidade de bloquear a proliferação celular, sendo que aproximadamente 25% dos tumores respondem ao tratamento com rapamicina. O alvo final da rapamicina na maquinaria de tradução é o fator eIF4E que é regulado pela eIF4E-BP. Em estudos prévios caracterizamos uma proteína desta via denominada alpha4, a qual interage com a subunidade catalítica das fosfatases do tipo 2A. Uma segunda proteína que interage com estas fosfatases é a hTIP41. Através do sistem duplo-híbrido de levedura identificamos a interação da hTip41 com as subunidades catalíticas das fosfatases PP2Aalfa, PP2Abeta, PP4 e PP6, além dos fatores de transcrição MafB e TAF10. Os experimentos neste caso envolvem determinar o mecanismo de regulação da destas fosfatases e destes fatores de transcrição pela proteína e hTip41. (AU)
Publicações científicas
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(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
DE VASCONCELLOS, JAIRA FERREIRA;
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