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Avaliação dos efeitos induzidos por cumarians sobre a atividade inflamatória e biológica de PLA2 de serpentes Bothrops Jararacussu e Crotalus durissus collilineatus

Processo: 06/55778-2
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de dezembro de 2006 - 31 de janeiro de 2009
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
Pesquisador responsável:Marcos Hikari Toyama
Beneficiário:Marcos Hikari Toyama
Instituição-sede: Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental do Litoral Paulista. São Vicente , SP, Brasil
Assunto(s):Edema  Dicroísmo circular  Purificação de proteínas  Enzimas  Cumarínicos  Fosfolipases A2 

Resumo

Este projeto tem como objetivo avaliar o efeito da incubação de PLA2 cataliticamente ativas de Crotalus durissus collilineatus com diferentes cumarinas sintéticas sobre a estrutura e atividade farmacológicas induzidas por esta enzima na ausência destes compostos. Também serão avaliados os efeitos da cumarina com PLA2 cataliticamente não ativas de Bothrops jararacussu. Para realização deste projeto será isolada a PLA2 de Crotalus durissus collilineatus e Bothrops jararacussu com alto grau de homogeneidade molecular, garantida pela utilização de HPLC de fase reversa, eletroforese em PAGE-SDS Tricina e espectrometria de massa. As PLA2 isoladas serão previamente incubadas com cumarinas sintéticas, durante um tempo a ser padronizado a fim de se obter o melhor resultado. Para uma avaliação mais precisa das alterações induzidas pelas cumarinas sobre a PLA2, pretendemos separa-la através de HPLC de fase reversa. Uma vez isolada a molécula, ela será examinada por técnica de dicroísmo circular a fim de verificar as alterações moleculares em nível de estrutura secundária, correlacionando com alterações da estrutura terciária em solução, pelas técnicas de SAXs e possíveis modificações na estrutura primária das PLA2 modificadas. Decorrido essa fase, pretende-se utilizar as PLA2 isoladas do tratamento com cumarinas em ensaios enzimáticos e em ensaios farmacológicos a fim de verificar qual efeito real do tratamento da cumarina com a molécula de PLA2, para isso, serão empregados os seguintes ensaios: - Atividade enzimática: serão analisados os efeitos das cumarinas sobre os parâmetros enzimáticos das PLA2 ativas. - Neurotoxicidade em junção neuromuscular de camundongos e pintainhos - Miotoxicidade em músculo gastrocnêmico de rato: como a miotoxicidade é um dos principais eventos patológicos do envenenamento por venenos de serpentes, será avaliado o potencial antimiotóxico das cumarinas sobre as PLA2. - Inflamação: a atividade inflamatória será realizada usando-se o edema de pata como modelo de estudo, utilizando PLA2 previamente tratadas com cumarinas. - Agregação plaquetária: Para estes ensaios avaliaremos o efeito de PLA2 nativas ou modificadas sobre dois modelos de agregação plaquetária, uma em plasma rico em plaqueta ou modelos de plaquetas lavadas. - Secreção de insulina: A secreção de insulina pode ser potencializada por algumas toxinas de serpentes, por diferentes mecanismos. O efeito do tratamento de PLA2 com cumarinas pode ser sensivelmente analisado na secreção de insulina. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
TOYAMA, DANIELA DE OLIVEIRA; DOS SANTOS DIZ FILHO, EDUARDO BRITTO; CAVADA, BENILDO SOUSA; MATIAS DA ROCHA, BRUNO ANDERSON; BUZZO DE OLIVEIRA, SIMONE CRISTINA; COTRIM, CAMILA APARECIDA; GOMES SOARES, VERONICA CRISTINA; DELATORRE, PLINIO; MARANGONI, SERGIO; TOYAMA, MARCOS HIKARI. Umbelliferone induces changes in the structure and pharmacological activities of Bn IV, a phospholipase A(2) isoform isolated from Bothrops neuwiedi. Toxicon, v. 57, n. 6, p. 851-860, MAY 2011. Citações Web of Science: 13.
TOYAMA, D. O.; MARANGONI, S.; DIZ-FILHO, E. B. S.; OLIVEIRA, S. C. B.; TOYAMA, M. H. Effect of umbelliferone (7-hydroxycoumarin, 7-HOC) on the enzymatic, edematogenic and necrotic activities of secretory phospholipase A2 (sPLA2) isolated from Crotalus durissus collilineatus venom. Toxicon, v. 53, n. 4, p. 417-426, MAR 15 2009. Citações Web of Science: 29.
ZARA, FERNANDO JOSE; DIOGO REIGADA, ALVARO LUIZ; DOMINGUES PASSERO, LUIZ FELIPE; TOYAMA, MARCOS HIKARI. MYZOBDELLA PLATENSIS (HIRUNDINIDA: PISCICOLIDAE) IS TRUE PARASITE OF BLUE CRABS (CRUSTACEA: PORTUNIDAE). Journal of Parasitology, v. 95, n. 1, p. 124-128, FEB 2009. Citações Web of Science: 2.
DIZ FILHO‚ EBS; MARANGONI‚ S.; TOYAMA‚ DO; FAGUNDES‚ FHR; OLIVEIRA‚ SCB; FONSECA‚ FV; CALGAROTTO‚ AK; JOAZEIRO‚ PP; TOYAMA‚ MH. Enzymatic and structural characterization of new PLA2 isoform isolated from white venom of Crotalus durissus ruruima. Toxicon, v. 53, n. 1, p. 104-114, 2009. Citações Web of Science: 16.

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