Análise da expressão gênica global do fungo patogênico humano Aspergillus fumigatus em resposta a droga antifúngica da classe equinocandina e caracterização funcional de genes envolvidos

• Processo: 10/50878-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de agosto de 2010 - 31 de julho de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia
• Pesquisador responsável: Marcia Regina von Zeska Kress
• Beneficiário: Marcia Regina von Zeska Kress
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Aspergillus fumigatus Aspergilose pulmonar Expressão gênica Antifúngicos Calcineurina
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aspergillus Fumigatus | Calcineurina | Equinocandina | Transcriptoma

Resumo

A aspergilose é a maior causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos. Para entender melhor a patogênese "Aspergilose", é importante o conhecimento da composição, arquitetura e do mecanismo biossintético da parede celular do fungo, bem como os genes expressos e reprimidos durante o tratamento antifúngico. A inibição da 1,3-ß-D-glucano sintase pelo antifúngico da classe equinocandina, caspofungina, leva a um aumento compensatório da produção da quitina (Steven et al., 2006; Walker et al., 2008). Adicionalmente, este aumento compensatório da quitina é parcialmente regulado pela via da calcineurina (Wiederhold et al., 2005). O reduzido número de opções de tratamento antifúngico resultou em elevada taxa de resistência a droga em espécies fúngicas patogênicas. Assim, a identificação de novos alvos terapêuticos é um importante passo no desenvolvimento de novas terapias antifúngicas. A proposta do presente projeto é a análise do perfil da expressão gênica global de uma linhagem selvagem e calcineurina deletada de A. fumigatus na resposta ao antifúngico da classe equinocandina. Adicionalmente, dois genes relacionados dom a resistência a antifúngicos, hsp90 e age3, serão caracterizados fenitípicamente e funcionalmente em A. fumigatus. Para isso, são propostos os seguintes objetivos: 1- Para determinar a melhor concentração de antifúngico da classe equinocandina a ser utilizada para o experimento de microarray, será determinada a Concentração Inibitóri Mínima (CIM) e da Concentração Fungicida Mínima (CFM) para o referido antifúngico para as linhagens selvagem e calcineurina deletada de A.fumigatus, 2- Determinação e análise da expressão gênica global por microarray de linhagem de A. fumigatus selvagem e calcineurina deletada em resposta ao antifúngico da classe equinocandina e a validação dos genes diferencialmente expressos por PCR em tempo real; 3- Caracterização fenotípica e funcional dos genes hsp90 e age3 (deleção, teste de sensibilidade a diferentes condições, expressão de mRNA em diferentes condições, complementação do gene deletado para validar a deleção, etc); 4- Determinação de parceiros protéicos de Hsp90 e Age3 por intermédio de fusão dos genes com proteínas alvo para purificação de complexos protéicos (TAP-tag e S-tag); 5- Validação dos possíveis parceiros protéicos identificados na purificação de complexos protéicos (objetivo 4) por ensaio de Yeast-2-Hybrid (Y2H) e Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SALES-CAMPOS, HELIOSWILTON; TONANI, LUDMILLA; BARROS CARDOSO, CRISTINA RIBEIRO; VON ZESKA KRESS, MARCIA REGINA. The Immune Interplay between the Host and the Pathogen in Aspergillus fumigatus Lung Infection. BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, 2013. (10/50878-4)

SALES-CAMPOS, HELIOSWILTON; TONANI, LUDMILLA; BARROS CARDOSO, CRISTINA RIBEIRO; VON ZESKA KRESS, MARCIA REGINA. The Immune Interplay between the Host and the Pathogen in Aspergillus fumigatus Lung Infection. BIOMED RESEARCH INTERNATIONAL, v. 2013, p. 14-pg., 2013-01-01. (10/50878-4)