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Triagem de mutações em genes relacionados com resistência aos quimioterápicos em isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis pela PCR em tempo real com curva de dissociação de alta resolução

Resumo

A resistência do Mycobacterium tuberculosis aos fármacos utilizados no tratamento da tuberculose tem incentivado a pesquisa de novas drogas, nomecanismo molecular e desenvolvimento de técnicas que facilitem a detecção rápida da resistência micobacteriana. O objetivo deste estudo é estabelecer um sistema de detecção de mutações utilizando PCR em tempo real com curva de dissociação de alta resolução para identificação da resistência micobacteriana ao etambutol, isoniazida e rifampicina. Os genes KatG, EmbB, rpoB e a região promotora dos genes InhA e AhpC, importantes na resistência micobacteriana, serão utilizados. Serão avaliados 80 isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis da nossa bacterioteca com perfil de sensibilidade, já analisado pela técnica da rezasurina e pelo método das proporções. Os resultados obtidos com o HRM-qPCR serão comparados com o seqüenciamento dos genes em estudo e com o perfil de resistência fenotípico das cepas. Espera-se que o sistema proposto apresente maior sensibilidade, reprodutibilidade e baixo custo por análise quando comparado com as técnicas que empregam diversas sondas, PCR-SSCP ou seqüenciamento para identificar apenas as principais mutações de interesse clinico. (AU)

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