Triagem de mutações em genes relacionados com resistência aos quimioterápicos em isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis pela PCR em tempo real com curva de dissociação de alta resolução

• Processo: 09/14329-9
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Mario Hiroyuki Hirata
• Beneficiário: Mario Hiroyuki Hirata
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biologia molecular Mutação Resistência microbiana a medicamentos Quimioterápicos Tuberculose Mycobacterium tuberculosis Reação em cadeia por polimerase (PCR) Terapêutica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: mutação | Mycobacterium tuberculosis | Resistência Bacteriana | Biologia molecular

Resumo

A resistência do Mycobacterium tuberculosis aos fármacos utilizados no tratamento da tuberculose tem incentivado a pesquisa de novas drogas, nomecanismo molecular e desenvolvimento de técnicas que facilitem a detecção rápida da resistência micobacteriana. O objetivo deste estudo é estabelecer um sistema de detecção de mutações utilizando PCR em tempo real com curva de dissociação de alta resolução para identificação da resistência micobacteriana ao etambutol, isoniazida e rifampicina. Os genes KatG, EmbB, rpoB e a região promotora dos genes InhA e AhpC, importantes na resistência micobacteriana, serão utilizados. Serão avaliados 80 isolados clínicos de Mycobacterium tuberculosis da nossa bacterioteca com perfil de sensibilidade, já analisado pela técnica da rezasurina e pelo método das proporções. Os resultados obtidos com o HRM-qPCR serão comparados com o seqüenciamento dos genes em estudo e com o perfil de resistência fenotípico das cepas. Espera-se que o sistema proposto apresente maior sensibilidade, reprodutibilidade e baixo custo por análise quando comparado com as técnicas que empregam diversas sondas, PCR-SSCP ou seqüenciamento para identificar apenas as principais mutações de interesse clinico. (AU)