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Modulacao genica induzida pelo pre-condicionamento isquemico hepatico.

Resumo

A isquemia e reperfusão (I/R), presente nos estados de choque e nas manobras cirúrgicas complexas, induz reações que levam à lesões locais e sistêmicas, e contribuem para a disfunção de múltiplos órgãos. A apoptose representa um papel importante na patogênese da disfunção orgânica causada pela I/R. Várias estratégias tem sido propostas para minimizar essas lesões, dentre elas o pré-condicionamento isquêmico (PCI). O PCI é a indução de breves períodos de isquemia, seguidos de reperfusão, antes do período mais prolongado de isquemia. Estudos demonstram que o PCI melhora a resposta de diferentes tecidos aos insultos de I/R, permitindo à célula ser mais tolerante a hipóxia, provavelmente devido a mudanças na expressão de alguns genes relacionados a morte celular, dentre eles o Bcl-2, principal gene antiapoptótico. Tem sido demonstrado que a expressão do gene Bcl-2 está aumentada no PCI, levando alguns autores a relacionar seu aumento à diminuição da apoptose. Animais não pré-condicionados, apresentam uma diminuição da expressão do gene Bcl-2 associado a um aumento da apoptose. Neste projeto testaremos a hipótese que os efeitos benéficos induzidos pelo pré-condicionamento hepático serão anulados pelo bloqueio do gene Bcl-2, através de RNAs de interferência (iRNAs), injetados na veia caudal. Para o experimento utilizaremos 70 ratos, previamente anestesiados. Os elementos vasculares do lóbulo hepático esquerdo superior, serão isolados para pinçamento e posterior reperfusão. O PCI será realizado em dois ciclos de 10 min de isquemia, seguido de 10 min de reperfusão, precedendo a isquemia de 40 min. Os animais serão divididos em oito grupos conforme a presença de PCI, iRNAs e o tempo de observação (30 ou 240 minutos): I/R30 min, I/R240 min, IPC30 min, IPC240 min, IPC30+ iRNA min, iRNA+IPC240 min, SHAM30 min, SHAM240 min. A interação entre o gene Bcl-2 e os benefícios do PCI, serão avaliados pelas expressão de Bcl-2, liberação de citocromo C, apoptose (Caspase3 e TUNEL), histologia e enzimas hepáticas TGO,TGP e LDH. (AU)