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Avaliação do papel dos receptores TLR2 e TLR4 na produção de citocinas por fibroblastos humanos periodontais deficientes desses receptores

Processo: 10/01230-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de junho de 2010 - 31 de maio de 2012
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Odontologia - Periodontia
Pesquisador responsável:Carlos Ferreira dos Santos
Beneficiário:Carlos Ferreira dos Santos
Instituição-sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
Pesq. associados:Carlos Alberto de Souza Costa
Assunto(s):Receptor 4 toll-like  Receptor 2 toll-like  Citocinas  Periodontite  Fibroblastos 

Resumo

Fibroblastos periodontais são células capazes de responder à estímulos bacterianos com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório. Há evidências do reconhecimento desses estímulos pela participação de receptores do tipo Toll (TLRs), sendo o TLR2 e TLR4 bastante estudados como responsáveis por esse mecanismo nos fibroblastos de ligamento periodontal e de gengiva. No entanto, essa expressão de receptores pelos fibroblastos periodontais permanece controversa na literatura e ainda não há estudos que avaliem o comportamento dessas células, quando deficientes desses receptores, quanto à expressão de citocinas como MIP-1±, SDF-1, IL-6 e IL-10. Assim sendo, este trabalho tem como objetivos: avaliar e comparar a expressão de receptores TLR2 e TLR4 por fibroblastos humanos provenientes de ligamento periodontal e de gengiva estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) de P. gingivalis e avaliar a produção de citocinas em fibroblastos deficientes desses receptores. Serão coletados ligamentos periodontais de terceiros molares hígidos e biópsias de gengiva dos mesmos doadores (n=3). Estes tecidos serão picotados e mantidos em meio de cultura adequado para fibroblastos, sendo utilizados entre a 4ª e 8ª passagem. Após adesão dos fibroblastos a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,1 - 10 ¼g/mL de LPS de P. gingivalis será adicionado às placas em duplicata. A expressão de TLR2 e TLR4 será analisada por western blot nas células estimuladas em comparação às células não submetidas ao estímulo (controle). Será feito o silenciamento dos genes de TLR2 e TLR4 por meio da utilização de RNAi, seguido de testes que avaliem a eficiência da transfecção das culturas como RealTimePCR e Western Blot . Para avaliar a produção de citocinas pelos fibroblastos deficientes de TLR2 e TLR4, será feito ELISA. (AU)

Publicações científicas (5)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
KARIN CRISTINA DA SILVA MODENA; ADRIANA MARIA CALVO; CARLA RENATA SIPERT; THIAGO JOSÉ DIONÍSIO; MARIA FIDELA DE LIMA NAVARRO; MARIA TERESA ATTA; CARLOS FERREIRA SANTOS. Dental Pulp Fibroblasts Response after Stimulation with HEMA and Adhesive System. Brazilian Dental Journal, v. 29, n. 5, p. -, Set. 2018.
SANTOS, CARLOS F.; MORANDINI, ANA C.; DIONISIO, THIAGO J.; FARIA, FLAVIO A.; LIMA, MARTA C.; FIGUEIREDO, CAIO M.; COLOMBINI-ISHIKIRIAMA, BELLA L.; SIPERT, CARLA R.; MACIEL, RUBENS P.; AKASHI, ANA P.; SOUZA, GABRIELA P.; GARLET, GUSTAVO P.; RODINI, CAMILA O.; AMARAL, SANDRA L.; BECARI, CHRISTIANE; SALGADO, MARIA C.; OLIVEIRA, EDUARDO B.; MATUS, ISAAC; DIDIER, DANIELA N.; GREENE, ANDREW S. Functional Local Renin-Angiotensin System in Human and Rat Periodontal Tissue. PLoS One, v. 10, n. 8 AUG 5 2015. Citações Web of Science: 6.
AZEVEDO, FABIOLA PONTES; FARIA MORANDINI, ANA CAROLINA; SIPERT, CARLA RENATA; DIONISIO, THIAGO JOSE; SANTOS, CARLOS FERREIRA; DAMANTE, CARLA ANDREOTTI; RUBO DE REZENDE, MARIA LUCIA; PASSANEZI SANT'ANA, ADRIANA CAMPOS; AGUIAR GREGHI, SEBASTIAO LUIZ. Palatal mucosa derived fibroblasts present an adaptive behavior regarding cytokine secretion when grafted onto the gingival margin. BMC ORAL HEALTH, v. 14, MAR 20 2014. Citações Web of Science: 1.
MORANDINI, ANA CAROLINA; CHAVES SOUZA, PEDRO PAULO; RAMOS-JUNIOR, ERIVAN SCHNAIDER; SOUZA COSTA, CARLOS ALBERTO; SANTOS, CARLOS FERREIRA. MyD88 or TRAM Knockdown Regulates Interleukin (IL)-6, IL-8, and CXCL12 mRNA Expression in Human Gingival and Periodontal Ligament Fibroblasts. Journal of Periodontology, v. 84, n. 9, p. 1353-1360, SEP 2013. Citações Web of Science: 11.
MORANDINI, ANA CAROLINA F.; CHAVES SOUZA, PEDRO PAULO; RAMOS-JUNIOR, ERIVAN SCHNAIDER; BROZOSKI, DANIEL THOMAS; SIPERT, CARLA RENATA; SOUZA COSTA, CARLOS ALBERTO; SANTOS, CARLOS FERREIRA. Toll-Like Receptor 2 Knockdown Modulates Interleukin (IL)-6 and IL-8 but not Stromal Derived Factor-1 (SDF-1/CXCL12) in Human Periodontal Ligament and Gingival Fibroblasts. Journal of Periodontology, v. 84, n. 4, p. 535-544, APR 2013. Citações Web of Science: 26.

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