Avaliação da influência da irradiação com laser em baixa intensidade no comportamento proliferativo e metabólico de osteoblastos humanos in vitro

• Processo: 07/08367-0
• Linha de fomento: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de julho de 2008 - 31 de dezembro de 2010
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Camila Peres Buzalaf
• Beneficiário: Camila Peres Buzalaf
• Instituição-sede: Faculdade de Odontologia de Bauru (FOB). Universidade de São Paulo (USP). Bauru , SP, Brasil
• Assunto(s): Cultura de células Terapia a laser de baixa intensidade Cicatrização Osteoblastos

Resumo

A terapia com laser em baixa intensidade tem sido utilizada para aceleração da cicatrização de feridas, porém muito dos seus mecanismos de ação não estão totalmente esclarecidos, o que reflete a divergência de resultados na literatura. A influência positiva do laser em osteoblastos seria de grande utilidade no campo da regeneração óssea. A descoberta sobre quais proteínas teriam seus perfis alterados e expressão modificada sob a ação do laser, poderia contribuir sobremaneira para o entendimento dos seus mecanismos de ação na remodelação óssea. Diante desses fatos, o objetivo do presente projeto será avaliar o comportamento de osteoblastos humanos submetidos a diferentes intensidades de fototerapia com laser. Serão plaqueadas 103 (viabilidade celular) e 5x103 (atividade enzimática e blots) células da linhagem hFOB 1.19 em placas de 96 poços, as quais serão irradiadas com laser vermelho (660nm) e infravermelho (780nm) nas doses de 3 e 5 J/cm². Os meios condicionados e osteoblastos serão coletados e avaliados quanto à viabilidade celular (contagem de células, redução do MTT e captação do Vermelho Neutro) e atividade de enzimas (fosfatase ácida total (FAT), fosfatase lisossomal (FAL) e proteína tirosina fosfatase (PTP)). A síntese de alguns transcritos e proteínas (metaloproteinases de matriz (MMPs 2 e 9), ligante do ativador do receptor do fator kappa B nuclear (RANKL) e osteoprotegerina (OPG)) será avaliada por meio de zimografia, RT-PCR e proteômica. Após a preparação das proteínas dos osteoblastos humanos, as mesmas serão submetidas à eletroforese bidimensional e zimografia. Os géis dos grupos controle e tratados serão escaneados utilizando-se o ImageScanner e analisados com o software ImageMaster Platinum. Os spots de interesse serão excisados e analisados por espectrometria de massa (MALDI-TOF) para identificação das proteínas. O RT-PCR será realizado para quantificação dos transcritos de MMP-2 e 9, RANKL e OPG. As análises estatísticas serão feitas através dos testes ANOVA, Kruskal-Wallis, e teste "t", de acordo com sua indicação (p<0,05). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DE OLIVEIRA, FLAVIA AMADEU; MATOS, ADRIANA ARRUDA; MATSUDA, SANDRA SATIKO; RABELO BUZALAF, MARILIA AFONSO; BAGNATO, VANDERLEY SALVADOR; DE ANDRADE MOREIRA MACHADO, MARIA APARECIDA; DAMANTE, CARLA ANDREOTTI; DE OLIVEIRA, RODRIGO CARDOSO; PERES-BUZALAF, CAMILA. Low level laser therapy modulates viability, alkaline phosphatase and matrix metalloproteinase-2 activities of osteoblasts. JOURNAL OF PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY B-BIOLOGY, v. 169, p. 35-40, APR 2017. Citações Web of Science: 6.

OLIVEIRA, FLAVIA A.; MATOS, ADRIANA A.; SANTESSO, MARIANA R.; TOKUHARA, CINTIA K.; LEITE, ALINE L.; BAGNATO, VANDERLEY S.; MACHADO, MARIA A. A. M.; PERES-BUZALAF, CAMILA; OLIVEIRA, RODRIGO C. Low intensity lasers differently induce primary human osteoblast proliferation and differentiation. JOURNAL OF PHOTOCHEMISTRY AND PHOTOBIOLOGY B-BIOLOGY, v. 163, p. 14-21, OCT 2016. Citações Web of Science: 16.

RICCI VOLPATO, LUIZ EVARISTO; DE OLIVEIRA, RODRIGO CARDOSO; ESPINOSA, MARIANO MARTINEZ; BAGNATO, VANDERLEY SALVADOR; MACHADO, MARIA A. A. M. Viability of fibroblasts cultured under nutritional stress irradiated with red laser, infrared laser, and red light-emitting diode. Journal of Biomedical Optics, v. 16, n. 7 JUL 2011. Citações Web of Science: 26.