Detecção do vírus Epstein-Barr (EBV) na mucosa oral de pacientes imunossuprimidos pela técnica de hibridização "in situ" em citologia esfoliativa de base líquida.

• Processo: 07/07741-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de abril de 2008 - 30 de setembro de 2009
• Área do conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia
• Pesquisador responsável: Marina Helena Cury Gallottini
• Beneficiário: Marina Helena Cury Gallottini
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FO). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Patologia bucal Herpesvirus humano 4 AIDS Hibridização in situ Leucoplasia pilosa Imunossupressão
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aids | citologia esfoliativa de base líquida | Ebv | Hibridização in situ | Imunossupressão | leucoplasia pilosa | Patologia Bucal

Resumo

O vírus Epstein-Barr (EBV) é um membro da família do vírus herpes humano presente na saliva de indivíduos saudáveis assintomáticos numa porcentagem que varia de 30 à 95% da população adulta mundial. Em pacientes imunossuprimidos, o EBV está envolvido na patogênese de linfomas, doença de Hodgkin, desordens linfoproliferativas e leucoplasia pilosa.A leucoplasia pilosa é uma lesão benigna da mucosa oral que apresenta-se como uma placa branca, corrugada, indolor, que não sede à raspagem, mais comumente encontrada em borda lateral de língua. Sua etiopatogenia está relacionada à replicação do EBV nas camadas superficiais do epitélio. Foi descrita inicialmente como exclusivamente associada à AIDS, porém, posteriormente à sua descrição, alguns casos foram diagnosticados em pacientes HIV-negativos imunossuprimidos cronicamente, em especial os transplantados de órgãos sólidos. Clinicamente, seu diagnóstico diferencial se faz com hiperparaqueratose, candidíase hiperplásica, líquen plano, nevo branco esponjoso, leucoplasia idiopática ou associada ao tabaco e glossite migratória. O estabelecimento do diagnóstico definitivo da LP é importante pois ela representa um marcador da imunossupressão do paciente.O diagnóstico final da leucoplasia pilosa é estabelecido pela detecção do EBV, associado a um quadro histopatológico não especifico. A detecção do vírus pode ser feita através de diversas técnicas como a PCR (polimerase chain reaction), hibridização in situ, imunohistoquímica, imunocitoquímica e microscopia eletrônica. O material para exame classicamente é oriundo de biópsias. O uso da citologia esfoliativa como alternativa menos invasiva no diagnóstico da leucoplasia pilosa tem sido postulada por alguns autores. No entanto, as características citopatológicas da lesão, coradas pelo Papanicoulau, isoladamente, não são suficientes para o estabelecimento do diagnóstico definitivo. O uso da PCR em material obtido através de raspados de mucosa, pode detectar partículas virais do EBV presentes na saliva e não no interior das células epiteliais. Para a validação da citologia esfoliativa como exame complementar para o diagnóstico definitivo de LP, o ideal seria o uso de técnicas in situ. Dentro deste contexto nosso trabalho tem por objetivo a padronização da hibridização in situ para detecção do EBV em raspados de mucosa oral, o que possibilitaria uma técnica menos invasiva para o diagnóstico da LP. Para isso, serão realizados raspados de borda lateral de língua de 60 pacientes, divididos em 3 grupos distintos. O grupo 1 será constituído por 20 pacientes HIV positivos com lesões bucais sugestivas clinicamente de leucoplasia pilosa; o grupo 2, por 20 pacientes HIV positivos sem evidência clínica de qualquer lesão bucal; grupo 3, por 20 pacientes HIV negativos imunocompetentes com mucosa oral clinicamente saudável, que constituirá o grupo controle.Em todos os pacientes serão executados raspados de borda lateral de língua por meio de citologia de base líquida (sistema DNA-Citoliq®). Os pacientes do grupo 1 serão submetidos também à biópsia incisional das lesões sugestivas de leucoplasia pilosa a fim de se estabelecer o diagnóstico através do padrão ouro atualmente aceito ( biópsia + hibridização in situ).O material coletado através dos raspados será analisado morfologicamente (coloração de Papanicoulau) e melecularmente, por meio de hibridização in situ para o EBV (sonda EBER).Analisaremos a sensibilidade e a especificidade do teste molecular realizado nos espécimes obtidos através da citologia esfoliativa, baseando-nos nos resultados obtidos através da biópsia (padrão ouro). Caso comprove-se alta sensibilidade e especificidade do exame testado, analisaremos a diferença na incidência de detecção do EBV nos diversos grupos de pacientes analisados. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

BRAZ-SILVA, P. H.; SANTOS, R. T. M.; SCHUSSEL, J. L.; GALLOTTINI, M.. Oral hairy leukoplakia diagnosis by Epstein-Barr virus in situ hybridization in liquid-based cytology. CYTOPATHOLOGY, v. 25, n. 1, p. 21-26, FEB 2014. (07/07741-5)