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Estudos de imunização e moleculares sobre o vírus respiratório sincicial humano

Processo: 09/17587-9
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de abril de 2010 - 31 de outubro de 2012
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Microbiologia
Pesquisador responsável:Armando Morais Ventura
Beneficiário:Armando Morais Ventura
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Expressão de proteínas  Vacinas de DNA  Purificação de proteínas  Virologia  Imunidade celular 

Resumo

O vírus Sincicial Respiratório Humano (HRSV) é um patógeno importante principalmente em crianças e prevalente globalmente. O desenvolvimento de uma vacina efetiva contra o HRSV ainda não foi possível, havendo também muito a ser compreendido sobre sua interação com o hospedeiro. Em trabalhos anteriores clonamos e expressamos vários genes do HRSV em diferentes vetores, e verificamos que para obter um bom nível de expressão é necessário otimizar os genes virais retirando sinais que bloqueiam a transcrição nuclear. Em continuidade, propomos utilizar os genes otimizados das proteínas virais M, N e P, já obtidos, como vacinas de DNA. É nosso objetivo também, utilizar várias proteínas virais que expressamos em bactérias como imunógenos. A proteína M foi expressa no vetor pET, e as proteínas N e P no pMAL. Subclonamos a seqüencia codificadora de um peptídeo da glicoproteína G do envelope viral, que concentra epítopos importantes, isolada ou em fusão com o gene da subunidade B da toxina colérica. Almejamos também ampliar o painel de epítopos de células T caracterizados para HRSV, e da proteína L verificamos que dois epítopos induziram resposta celular significativa em camundongos. Propomos neste projeto finalizar essa caracterização e juntar a esses epítopos os já descritos na literatura, compondo uma vacina de DNA no formato de minigene. Além dos estudos de imunização, a expressão eficiente dos genes otimizados de M, N e P, nos permitiu a realização de uma série de experimentos de localização intracelular e de imunoprecipitação, e o estudo da interação dessas proteínas virais com proteínas celulares. Assim, outro objetivo é de continuar essa abordagem, explorando detalhes da replicação e potenciais alvos de intervenção antiviral. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
MEDINA-ARMENTEROS, YORDANKA; FARINHA-ARCIERI, LUIS E.; BRAGA, CATARINA J. M.; CARROMEU, CASSIANO; TAMURA, RODRIGO E.; VENTURA, ARMANDO M. Mapping of CD8 T Cell Epitopes in Human Respiratory Syncytial Virus L Protein. Intervirology, v. 57, n. 2 2014. Citações Web of Science: 0.
OLIVEIRA, ANDRESSA P.; SIMABUCO, FERNANDO M.; TAMURA, RODRIGO E.; GUERRERO, MANUEL C.; RIBEIRO, PAULO G. G.; LIBERMANN, TOWIA A.; ZERBINI, LUIZ F.; VENTURA, ARMANDO M. Human respiratory syncytial virus N, P and M protein interactions in HEK-293T cells. VIRUS RESEARCH, v. 177, n. 1, p. 108-112, OCT 2013. Citações Web of Science: 17.

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