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Confirmação de uma possível nova forma de modificação pós-traducional de polipeptídeos mitocondriais

Processo: 09/07749-1
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2009 - 31 de agosto de 2011
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Mario Henrique de Barros
Beneficiário:Mario Henrique de Barros
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):09/14940-0 - Confirmação de uma possível nova forma de modificação pós-traducional de polipeptídeos mitocondriais, BP.TT
Assunto(s):Biogênese  Saccharomyces cerevisiae  Mitocôndrias  Polipeptídeos  Fenótipo  Mutagênese 

Resumo

Em projetos anteriores estudamos a biogênese mitocondrial, descrevendo a função de alguns genes tais como: COX23, COX24, COQ9, COQ10, ATP25 e COX21.Ao finalizar um primeiro estudo do gene COX21 , está claro seu efeito sobre os polipeptídeos mitocondriais Cox2p e Atp8p. No isolamento de alelos de COX21 sensíveis a temperatura, observou-se que na temperatura não permissiva Atp8p é logo degradado e Cox2p possui propriedades eletroforéticas diferenciadas do que até então havia sido descrito, sugerindo que Cox21p possa atuar pós-traducionalmente nesses polipeptídeos. A partir de uma biblioteca genômica, identificou-se também PET112 como um supressor genético do fenótipo de sensibilidade a temperatura dos alelos de COX21. A função de Pet112p em Saccharomyces cerevisiae foi recentemente relacionada a formação de um complexo com Her2p e Cox21p na transamidação de glutamil-tRNAGln gerando glutaminil-tRNAGln C. De fato, seu homólogo de procariontes pertence ao complexo GatABC há tempos caracterizado, mas até essa publicacação a literatura indicava que glutaminil-tRNA sintetase oriunda do citossol realizasse também a função mitocondrial.Nesse projeto buscaremos confirmar se o complexo Cox21-Pet112-Her2p, realiza uma segunda função mitocondrial, modificando pós-traducionalmente alguns poplipeptídeos mitocondriais. Essa distinção é prioritária, pois com a revelação da existência do complexo Cox21-Pet112-Her2p pode-se aventar que os fenótipos bioquímicos caracterizados para os mutantes condicionais cox21 são decorrentes da incorporação errônea de glutâmico no lugar de glutamina em todas proteínas mitocondriais, e por alguma razão Cox2p e Atp8p teriam tais modificações mais facilmente detectáveis. Através do estudo das enzimas citossólicas glutaminil-tRNA sintetase e glutamico-tRNA sintetase, bem como após geração de mutantes condicionais para PET112 e HER2 procuraremos elucidar essas questões. (AU)