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Caracterizacao de uma putativa quinase dependente de ciclina e analise de sua possivel atuacao nos endociclos de rhynchosciara americana

Processo: 08/53023-0
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de setembro de 2008 - 31 de agosto de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Fábio Siviero
Beneficiário:Fábio Siviero
Instituição-sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Cromatina  Rhynchosciara  Biologia do desenvolvimento  Ciclo celular 

Resumo

O presente trabalho tem como objetivo caracterizar um gene de uma putativa quinase dependente de cidina (similar a Cdc2/Cdk10) e analisar sua possível atuação nos endociclos de Rhynchosciara americana. Interessantemente um transcrito correspondente a este gene foi identificado em uma biblioteca de cDNA de glândulas salivares, a qual foi construída com mRNAs presentes durante o período em que ocorre o último ciclo replicativo da politenização e inicio da amplificação gênica de diferentes pufes de DNA. No entanto, ainda não foi descrita a participação de uma Cdc2/CDK10 em processos endoreplicativos nem foi identificada uma cidina reguladora em nenhum modelo biológico, o que torna este gene um candidato potencialmente interessante. A fim de caracterizar o putativo Cdc2/Cdk10 objetiva-se clonar a porção 5’ de seu mensageiro através de RACE e utilizar o cDNA completo como sonda para uma varredura de uma biblioteca genômica construída em fagos. O clone genômico será utilizado para localização cromossômica deste gene por meio de hibridização in situ fluorescente (FISH) e para seqüenciamento. O perfil de expressão será traçado por Real Time RT-PCR em glândula salivar e corpo gorduroso em diferentes fases do desenvolvimento e complementado por western blots com uso de anticorpo específico contra CDC2/CDK10 de Rhynchosciara. Possíveis indicações de suas funções durante endociclos seriam obtidas através de experimentos de silenciamento gênico por RNAi. A análise de imunoblots de eletroforese 2D de extratos celulares seria utilizada para determinar outras informações sobre CDC2/CDK10, tais como possíveis isoformas e modificações pós-traducionais em diferentes tecidos ou fases do desenvolvimento. (AU)

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Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
SIMON, CLAUDIO ROBERTO; SIVIERO, FABIO; MONESI, NADIA. Beyond DNA puffs: What can we learn from studying sciarids?. Genesis, v. 54, n. 7, p. 361-378, JUL 2016. Citações Web of Science: 4.

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