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Avaliação da Fosfolipase A2 secretórias na infecção experimental causada por Leishmania (Leishmania) amazonensis

Processo: 07/54714-3
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de maio de 2008 - 30 de abril de 2010
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica
Pesquisador responsável:Marcos Hikari Toyama
Beneficiário:Marcos Hikari Toyama
Instituição-sede: Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental do Litoral Paulista. São Vicente , SP, Brasil
Assunto(s):Inibidores de fosfolipase A2  Inflamação  Fosfolipases A2  Interleucinas 

Resumo

Neste projeto pretende-se avaliar a ação de PLA2 secretórias isolada do veneno de C. d. collilineatus sobre a infecção da Leishmania (L) amazonensis in vivo. Inicialmente serão analisados os efeitos da crotoxina sobre o crescimento da promastigota de L. (L) amazonensis em comparação com outras frações presentes no veneno desta cascavel (convulxina, giroxina e crotamina), o monitoramento será feito através de contagem e pelo uso do MTS, verificação da viabilidade celular. As isoforrnas de PLA2 e crotapotina serão isoladas por técnicas em HPLC de fase reversa e a homogeneidade molecular destas isoformas será confirmado por técnicas de PAGE-SDS e espectrometria de massa e a atividade enzimática da PLA2 confirmada por ensaios cinéticos específicos. Também avaliaremos o efeito de ambas amostras sobre promastigotas de L. (L.) amazonensis, bem com os efeitos citotóxicos das PLA2 e Crtp sobre os macrófagos e sobre macrófagos infectados. O monitoramento da ação destas toxinas sobre o progresso da infecção será avaliado pela técnica ELISA in situ e o efeito das PLA2 sobre as promastigotas será avaliado por contagem e por visualização sob microscopia óptica. O sobrenadante das células infectadas será colhido e congelados para quantificação das interleucinas por ELISA de captura dando um enfoque especial as IL-2; IL-4; IL-12 e IFN-gamma. "ln vivo" pretendemos verificar o efeito destas proteínas sobre a infecção em camundongos BALB/c. onde a severidade da infecção será medida pelo tamanho da lesão, que também será submetida a análises histopatológicas. Na terceira etapa, pretendemos verificar a presença principalmente da PLA2 secretórias tanto no sobrenadante como no lisado de L. (L). amazonensis e avaliar os efeitos de inibidores específicos de PLA2 sobre a atividade enzimática in vitro, além disso, serão utilizadas outros inibidores específicos para as PLAZ citossólicas. Alem destes compostos examinaremos o efeito de inibidores do metabolismo do ácido araquidônico como a dexametasona e indometacina. Como último objetivo, comparar qualitativamente e quantitativamente os perfis protéicos presentes em formas metacíclicas de L.(L.) amazonensis, por técnicas analíticas e tentar caracterizar a presença de PLA2 destes parasitos. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FAGUNDES, FABIO H. R.; APARICIO, RICARDO; DOS SANTOS, MARCELO L.; DIZ FILHO, EDUARDO B. S.; OLIVEIRA, SIMONE C. B.; TOYAMA, DANIELA O.; TOYAMA, MARCOS H. A Catalytically Inactive Lys49 PLA2 Isoform from Bothrops jararacussu venom that Stimulates Insulin Secretion in Pancreatic Beta Cells. PROTEIN AND PEPTIDE LETTERS, v. 18, n. 11, p. 1133-1139, NOV 2011. Citações Web of Science: 6.
TOYAMA, DANIELA DE OLIVEIRA; DOS SANTOS DIZ FILHO, EDUARDO BRITTO; CAVADA, BENILDO SOUSA; MATIAS DA ROCHA, BRUNO ANDERSON; BUZZO DE OLIVEIRA, SIMONE CRISTINA; COTRIM, CAMILA APARECIDA; GOMES SOARES, VERONICA CRISTINA; DELATORRE, PLINIO; MARANGONI, SERGIO; TOYAMA, MARCOS HIKARI. Umbelliferone induces changes in the structure and pharmacological activities of Bn IV, a phospholipase A(2) isoform isolated from Bothrops neuwiedi. Toxicon, v. 57, n. 6, p. 851-860, MAY 2011. Citações Web of Science: 14.
TOYAMA, D. O.; MARANGONI, S.; DIZ-FILHO, E. B. S.; OLIVEIRA, S. C. B.; TOYAMA, M. H. Effect of umbelliferone (7-hydroxycoumarin, 7-HOC) on the enzymatic, edematogenic and necrotic activities of secretory phospholipase A2 (sPLA2) isolated from Crotalus durissus collilineatus venom. Toxicon, v. 53, n. 4, p. 417-426, MAR 15 2009. Citações Web of Science: 33.

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