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Sintese de tireotrofina humana (r-htsh) em celulas cho "humanizadas", capazes de introduzir a ligacao alfa-2,6 entre o acido sialico e a galactose.

Resumo

A glicosilação é uma modificação pós-traducional que pode afetar profundamente as características das glicoproteínas como sua atividade biológica e propriedades farmacológicas. Na tentativa de expressar a tireotrofina humana recombinante (r-hTSH) em células hospedeiras cujas características de glicosilação, particularmente de sialilação, são mais semelhantes às células humanas, nos propomos estudar uma tireotrofina derivada de células de hamster chinês (CHO) modificadas com a introdução do gene que codifica a enzima α2,6 sialiltransferase. Estas células, portanto, possuem os mecanismos necessários para a ligação do ácido siálico terminal com a galactose, na conformação α2,6, além da α2,3 já presente na cepa selvagem. Ressaltamos de fato que enquanto as células hipofisárias humanas possuem a capacidade de sialilar o hTSH em posição α2,6 e α2,3, as células CHO somente sialilam em α2,3. O r-hTSH atualmente usado como biofármaco difere portanto do produto natural nesta característica, entre outras. De acordo com a nomenclatura vigente na literatura definimos seja as células CHO, assim modificadas, que o hTSH obtido, como "humanizados". Já foi desenvolvida, no Centro de Biotecnologia do IPEN-CNEN/SP, a síntese e purificação do r-hTSH a partir de células CHO sem esta modificação, tendo sido, a este respeito, depositada Patente em cotitularidade com a FAPESP e publicados diversos trabalhos. O objetivo principal do presente trabalho é, portanto, sintetizar, purificar e caracterizar um hTSH "humanizado" derivado de uma linhagem celular hospedeira com novas características de glicosilação e compará-lo com a preparação natural hipofisária e com o r-hTSH desenvolvido por nós anteriormente, quanto à atividade biológica in vivo e à presença de estruturas α2,3 e α2,6 na ligação ácido siálico-galactose, obtendo assim um produto farmacêutico mais próximo ao natural. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
ALMEIDA, B. E.; OLIVEIRA, J. E.; DAMIANI, R.; DALMORA, S. L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M. T. C. P. A pilot study on potency determination of human follicle-stimulating hormone: A comparison between reversed-phase high-performance liquid chromatography method and the in vivo bioassay. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 54, n. 4, p. 681-686, MAR 25 2011. Citações Web of Science: 8.
ALMEIDA, B. E.; OLIVEIRA, J. E.; CARVALHO, C. M.; DALMORA, S. L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M. T. C. P. Analysis of human luteinizing hormone and human chorionic gonadotropin preparations of different origins by reversed-phase high-performance liquid chromatography. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 53, n. 1, p. 90-97, SEP 21 2010. Citações Web of Science: 9.
DAMIANI, RENATA; OLIVEIRA, JOAO EZEQUIEL; VORAUER-UHL, KAROLA; PERONI, CIBELE NUNES; VIANNA, ELIZABETH GIMBO; BARTOLINI, PAOLO; RIBELA, MARIA TERESA C. P. Stable expression of a human-like sialylated recombinant thyrotropin in a Chinese hamster ovary cell line expressing alpha 2,6-sialyltransferase. Protein Expression and Purification, v. 67, n. 1, p. 7-14, SEP 2009. Citações Web of Science: 13.
CARVALHO, C. M.; OLIVEIRA, J. E.; ALMEIDA, B. E.; UEDA, E. K. M.; TORJESEN, P. A.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M. T. C. P. Efficient isolation of the subunits of recombinant and pituitary glycoprotein hormones. Journal of Chromatography A, v. 1216, n. 9, p. 1431-1438, FEB 27 2009. Citações Web of Science: 13.

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