Expressão de proteínas de interesse comercial obtida da hemolinfa de Lonomia obliqua em sistema de células de inseto/Baculovirus

• Processo: 08/57263-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Vigência: 01 de março de 2009 - 31 de agosto de 2011
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Ronaldo Zucatelli Mendonca
• Beneficiário: Ronaldo Zucatelli Mendonca
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotecnologia Hemolinfa Apoptose Expressão de proteínas Antivirais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antiviral | Apoptose | Baculovirus | Expressao | Hemolimfa | Peptideos Bioativos

Resumo

Recentemente, temos identificado e isolado proteínas de interesse farmacológico e biotecnológico da hemolinfa de Lonomia obliqua. Este projeto é uma continuação dessas pesquisas. Nestes estudos, duas proteínas têm um interesse mais relevante, uma delas com ação antiviral (Fapesp 06/02108-0) e uma segunda com atividade antiapoptótica (FAPESP 01/09040-8). Com base nesses estudos anteriores, os principais objetivos do presente projeto são: a) construir um sistema de expressão das duas proteínas, em células de Spodoptera frugiperda e em baculovírus (Sf9/baculovírus). b) desenvolver um protocolo de cultivo das células Sf9/baculovírus para expressão em escala laboratorial (20-50 mL) das duas proteínas, verificando a funcionalidade da proteína e realizando a caracterização bioquímica destas proteínas. Este estudo será realizado em duas etapas. Numa primeira etapa, as proteínas serão isoladas da hemolinfa de Lonomia obiqua através de técnicas cromatográficas e testadas em cultivos celulares para verificar a atividade biológica. As frações de interesse serão separadas quantificadas. Nesta etapa utilizaremos eletroforese em gel de poliacrilamida bidimensional (2D) para análise das proteínas, determinação da seqüência N-terminal das proteínas purificadas e espectrometria de massa. Numa segunda etapa, será feita a construção do vetor baculovírus com o gene de interesse, a transfecção celular, a produção em quantidades convenientes através de técnicas de cultivo celular, a purificação e a caracterização das proteínas obtidas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

CARMO, A. C. V.; GIOVANNI, D. N. S.; CORREA, T. P.; MARTINS, L. M.; STOCCO, R. C.; SUAZO, C. A. T.; MORAES, R. H. P.; VEIGA, A. B. G.; MENDONCA, R. Z.. Expression of an antiviral protein from Lonomia obliqua hemolymph in baculovirus/insect cell system. Antiviral Research, v. 94, n. 2, p. 126-130, MAY 2012. (08/57263-5)

DE LIMA-NETTO, SOLANGE; PINHEIRO, ALESSANDRO; NAKANO, ELIANA; ZUCATELLI MENDONCA, RITA MARIA; BARROS-BATTESTI, DARCI MORAES; MENDONCA, RONALDO ZUCATELLI. Antiviral effect of the egg wax of Amblyomma cajennense (Acari: Ixodidae). Cytotechnology, v. 64, n. 5, p. 601-606, OCT 2012. (08/57263-5)