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Caracterização da expressão gênico-protéica das proteínas de reparo MGMT e PTEN e seu potencial papel na carcinogênese e como fator prognóstico do câncer de mama

Processo: 09/14701-5
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de fevereiro de 2010 - 31 de janeiro de 2012
Área do conhecimento:Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
Pesquisador responsável:Rafael Malagoli Rocha
Beneficiário:Rafael Malagoli Rocha
Instituição-sede: Hospital A C Camargo. Fundação Antonio Prudente (FAP). São Paulo , SP, Brasil
Assunto(s):Técnicas de diagnóstico molecular  Reparo do DNA  O(6)-metilguanina-DNA metiltransferase  PTEN fosfo-hidrolase  Imuno-histoquímica  Neoplasias mamárias 

Resumo

Introdução: A O6-metilguanina-DNA metiltransferase (MGMT) é uma enzima de reparo de DNA que atua inibindo ligações cruzadas da dupla fita de DNA através da remoção de lesões alquilantes. O valor prognóstico da expressão desta enzima em diversos tumores identificada pela imuno-histoquímica (IHQ) ainda é controverso na literatura devido à heterogeneidade de sua expressão dentre diferentes tumores de diferentes graus. Fosfatase homóloga a tensina (PTEN) é um gene supressor de tumor que pode estar mutado ou deletado em uma grande variedade de tumores humanos. O gene PTEN regula o crescimento celular, apoptose e proliferação. A fosforilação da sua proteína causa sua inativação e diminui sua degradação. Pouco se sabe sobre a regulação do gene PTEN por hormônios ovarianos, no entanto, sabe-se que está presente com intensidade aumentada em tecidos sensíveis a esteróides como endométrio, próstata e mama. Objetivo: avaliar o valor prognóstico das proteínas MGMT e PTEN, bem como sua importância na gênese das neoplasias da mama e sua correlação com a evolução clínica de pacientes. Material & Métodos: sessenta carcinomas ductais invasores da mama serão selecionados aleatoriamente dos arquivos do Departamento de Anatomia Patológica do Hospital A C Camargo no período de 2000 a 2009. Seus blocos correspondentes serão resgatados para o estudo morfológico e IHQ. A confirmação diagnóstica será feita pelo H&E. Em seguida duas áreas representativas de cada tumor serão selecionadas nestas lâminas para a construção de um microarranjo de tecido (TMA) cujas lâminas serão utilizadas para o estudo IHQ e de hibridação in situ fluorescente (FISH). O status de receptores hormonais e HER2, bem como marcadores de fenótipo basal (CK5, CK14, p63, caveolina e EGFR) serão avaliados pela IHQ em todos os tumores. Serão feitos testes com cinco diferentes anticorpos contra MGMT e 18 diferentes anticorpos contra PTEN para eleição do melhor anticorpo tendo como padrão ouro o PCR em tempo real, para a MGMT, e o FISH para a PTEN. Após a seleção do melhor anticorpo, o mesmo será utilizado para o estudo IHQ dos tumores deste estudo. O estudo de hipermetilação da região promotora dos genes MGMT e PTEN será feito utilizando o método de pirosequenciamento (PyroMark MD, QIAgen). A avaliação da transcrição destes genes será feita por RT-PCR utilizando o sistema TaqMan Universal PCR Master Mix (Applied Biosystems®) no equipamento Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystem®). A presença e localização morfológica das proteínas MGMT e PTEN será avaliada visualmente nas secções marcadas pela IHQ e de forma automatizada por digitalizador de lâminas (Aperio®) associado a analisador automático de imagens (Scope®). Os seguintes dados clínicos das pacientes serão coletados dos prontuários do hospital: idade, cor, status menopausal, tamanho do tumor, grau nuclear, grau histológico, presença de desmoplasia, inflamação, componente in situ associado, status linfonodal, estadiamento, data de início do tratamento, tipo de tratamento (quimioterapia adjuvante ou neoadjuvante, hormonioterapia e radioterapia), recidiva, local da recidiva, sobrevida livre de doença, tempo de sobrevida. As informações obtidas sobre o status gênico-protéico das proteínas MGMT e PTEN serão correlacionados com as informações de status hormonal e HER2, bem como com os marcadores de fenótipo basal e dados clínicos das pacientes. (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
GRANDI, FABRIZIO; COLODEL, MARCIA M.; ROCHA, RAFAEL M.; SEQUEIRA, JULIO L. Sebaceous metaplasia in a canine mammary gland non-infiltrative carcinoma with myoepithelial component. JOURNAL OF VETERINARY DIAGNOSTIC INVESTIGATION, v. 23, n. 6, p. 1230-1233, NOV 2011. Citações Web of Science: 0.

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