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Caracterização de proteínas RNA-ligantes nos terminais pré-sinápticos de neurônios de lula (Loligo)

Resumo

As sinapses e axônios gigantes de lula (Loligo) representam um modelo clássico para elucidar mecanismos de fluxo axoplasmático e neurotransmissão. Este modelo neuronal também contribuiu para demonstrar que transporte, processamento e tradução de mRNAs ocorrem localmente na região pré-sináptica. As questões a serem abordados neste projeto são: 1) Quais são os componentes e mecanismos envolvidos no processamento e tradução de RNA no terminal pré-sináptico, usando o sistema nervoso de lulas como modelo; 2) Quais são os fatores de regulação; 3) Qual é a relação das proteínas ligantes de RNA com a função sináptica. Purificamos, identificamos e iniciamos a caracterização de uma proteína RNA ligante de 65 kDa (p65) de lóbulos óticos de lula (Loligo plei e Loligo pealei) (Lico et al, 2010). Temos dados eletrofisiológicos que p65 está envolvido em neurotransmissão na sinapse gigante de lula (Larson, Moreira e Llinas, manuscrito em preparação). Sua localização em terminais pré-sinápticos levou a hipótese de que o p65 possa participar em mecanismos de processamento e/ou tradução local de RNA. Seqüências do p65 obtidas por espectrometria de massas permitiram produção de anticorpos específicos. Análises in silico a partir de um banco de dados sobre Loligo pealei evidenciaram que se trata de uma família de proteínas RNA-ligantes sobre os quais pouco se conhece. Pretendemos aplicar métodos bioquímicos, de clonagem molecular, imunofluorescência e imunodetecção para caracterizar o p65, e proteínas relatas, visando elucidar sua função sináptica. (AU)

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