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Influência dos receptores Toll like 2 e 4 na reatividade glial e plasticidade sináptica de motoneurônios medulares após axotomia periférica

Processo: 10/17688-7
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de maio de 2011 - 30 de abril de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
Pesquisador responsável:Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira
Beneficiário:Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira
Instituição-sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
Bolsa(s) vinculada(s):11/11477-7 - Influência dos receptores toll like 2 e 4 na reatividade glial e plasticidade sináptica de motoneuônios medulares após axotomia periférica, BP.TT
Assunto(s):Regeneração nervosa  Receptores toll-like  Medula espinhal 

Resumo

As células da glia são responsáveis por intermediar a interação entre o Sistema Nervoso (SN) e o Sistema Imune (SI). Além disso, recentes estudos têm demonstrado que estas células expressam receptores Toll Like (TLRs) que podem interferir no processo de plasticidade do SNC. Desse modo, este estudo tem o objetivo de analisar a influência dos receptores Toll like 2 e 4 na reatividade glial e na dinâmica das sinapses em aposição a motoneurônios medulares de camundongos após lesão nervosa periférica. Para o presente estudo, serão utilizados 140 animais. Estes serão das linhagens C57BL/6 TLR2-/- (n=35), C57BL/6 (controle TLR2-/-, n=35), C3H/HeJ (TLR4 mutante, n=35) e C3H/HePas (controle - TLR4, n=35). Os camundongos serão submetidos à transecção ou esmagamento do nervo isquiático, de acordo com a análise a ser realizada. Para a transeção, os camundongos (C57BL/6 TLR2-/-, C57BL/6, C3H/HeJ e C3H/HePas; n= 20 para cada linhagem) serão anestesiados e submetidos à cirurgia de transecção, sendo removido um segmento de 2mm do coto distal do nervo. Uma semana após a transecção os animais serão anestesiados e sacrificados por perfusão transcardíaca. As medulas serão extraídas, sendo processadas para imunohistoquímica, microscopia eletrônica de transmissão, Western-blot e RT-PCR em tempo real (n=10 para cada técnica e grupo experimental). Os quinze animais restantes de cada linhagem terão o nervo isquiático esmagado, sendo sacrificados 2 semanas após a lesão, sendo avaliado o potencial regenerativo através de análises por imunohistoquímica, microscopia eletrônica de transmissão e teste funcional de recuperação motora (índice funcional do nervo isquiático). Para cada técnica, serão empregados cinco animais de cada linhagem. Em imunohistoquímica serão empregados os anticorpos anti-sinaptofisina, GFAP, Iba1 e MHC classe I. Em microscopia eletrônica de transmissão será analisada a aposição dos terminais pré-sinápticos dos motoneurônios alfa medulares e os nervos axotomizados. A análise por Western-blot será concentrada nas proteínas GFAP, sinaptofisina e MHC I. Através de RT-PCR, serão analisados os marcadores de ativação de microglia (F4/80) e astrogliose (GFAP). (AU)

Publicações científicas
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
FRERIA, C. M.; BERNARDES, D.; ALMEIDA, G. L.; SIMOES, G. F.; BARBOSA, G. O.; OLIVEIRA, A. L. R. Impairment of toll-like receptors 2 and 4 leads to compensatory mechanisms after sciatic nerve axotomy. JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, v. 13, MAY 24 2016. Citações Web of Science: 14.
FRERIA, CAMILA MARQUES; VELLOSO, LICIO AUGUSTO; OLIVEIRA, ALEXANDRE L. R. Opposing effects of Toll-like receptors 2 and 4 on synaptic stability in the spinal cord after peripheral nerve injury. JOURNAL OF NEUROINFLAMMATION, v. 9, OCT 23 2012. Citações Web of Science: 21.

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