Relação estrutura atividade entre os receptores AT1 e AT2 da angiotensina II e os receptores B1 e B2 de cininas a luz da estrutura do receptor CXCR4 da quemoquina

• Processo: 11/02208-2
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Suma Imura Shimuta
• Beneficiário: Suma Imura Shimuta
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Receptores de angiotensina Angiotensina II Cininas Receptores de quimiocinas Receptores CXCR4 Receptores acoplados a proteínas G Simulação de dinâmica molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: angiotensina | Cininas | Dinâmica Molecular | Gpcr | modelagem por homologia | mutação | Receptores Acoplados à Proteína G

Resumo

Recentes estudos tem demonstrado que há uma conservação estrutural entre diferentes receptores da mesma família, sendo portanto possível prever a conformação a partir de um molde que possui estrutura resolvida. Os receptores tipo 1 e tipo 2 da angiotensina II (AngII, AT1 e AT2 respectivamente) e os receptores tipo 1 e tipo 2 de cininas (B1 e B2 respectivamente) pertencem a família dos receptores acoplados à proteína G (GPCR), possuindo sete segmentos alfa helicoidais interligados por 3 alças extracelulares e 3 intracelulares além de um segmento N-terminal voltado para o lado extracelular e um C-terminal para o lado intracelular. Através da ativação desses receptores há uma mudança conformacional que ativa a proteína G que é responsável pela transdução do sinal para o lado intracelular. Para prever a estrutura dos receptores AT1, AT2, B1 e B2, utilizava-se como molde o a estrutura da rodopsina, também membro da família dos GPCR. Porém recentemente foi publicada a estrutura do receptor CXCR4 de quemoquina, estrutura essa que possuí elementos estruturais semelhantes a dos receptores citados acima que não está presente na rodopsina, assim como a inserção no loop EC-3 que contém uma Cys que faz uma ponte SS com outra Cys localizada no segmento N-terminal dos receptores, tornando-se assim um melhor molde para os receptores da AngII e de cininas. É de nosso interesse portanto, utilizar a estrutura do CXCR4 como molde para modelar esses receptores, para então submeter tais modelos à dinâmica molecular para que possamos apontar os sítios de interação inter e intramoleculares. Além disso, partindo de um modelo agonista-receptor bem definido para a interação receptor AT1 - AngII, mutações sitio-dirigidas no receptor AT2 (D297A, N127G e C35S) serão realizadas a fim de elucidar os sítios de ligação deste receptor com a AngII. Serão realizados testes funcionais com os mutantes do receptor AT2 efetuando-se dosagem de AMPc e [Ca2+]i, além do experimento de ligação em resposta à concentrações crescentes de angII e alguns análogos selecionados ([Sar1]-AngII, [Sar1Lys2]-AngII, [Sar1Ala2]-AngII, [Sar1Phe4]-AngII e [Sar1Ile4]-AngII). (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARTIN, RENAN P.; FILIPPELLI-SILVA, RAFAEL; RODRIGUES, ELIETE S.; NAKAIE, CLOVIS R.; SHIMUTA, SUMA I.. A fluorimetric binding assay for angiotensin II and kinin receptors. JOURNAL OF PHARMACOLOGICAL AND TOXICOLOGICAL METHODS, v. 79, p. 55-59, MAY-JUN 2016. (07/56480-0, 11/02208-2, 14/20965-3)

MARTIN, RENAN PAULO; FILIPPELLI-SILVA, RAFAEL; SHUKLA, AK. Non-radioactive binding assay for bradykinin and angiotensin receptors. G PROTEIN-COUPLED RECEPTORS, PT B, v. 149, p. 9-pg., 2019-01-01. (07/56480-0, 11/02208-2, 14/20965-3)