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Síntese e caracterização de diferentes glicoformas de tireotrofina humana recombinante (rhTSH) farmacologicamente ativas

Processo: 11/07289-0
Linha de fomento:Auxílio à Pesquisa - Regular
Vigência: 01 de agosto de 2011 - 31 de julho de 2013
Área do conhecimento:Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
Pesquisador responsável:Maria Teresa de Carvalho Pinto Ribela
Beneficiário:Maria Teresa de Carvalho Pinto Ribela
Instituição-sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
Pesq. associados:João Ezequiel de Oliveira ; Paolo Bartolini
Assunto(s):Hormônios adeno-hipofisários  Tireotropina  Glicoproteínas  Carboidratos  Glicosilação 

Resumo

A tireotrofina humana recombinante (rhTSH) é um hormônio glicoprotéico de grande interesse médico, amplamente utilizado no diagnóstico e terapia de câncer de tireóide, permitindo uma melhora considerável na qualidade de vida de pacientes com esta patologia e que, de outra forma, deveriam ser deixados em condição hipotireoidea com péssima qualidade de vida. Ressaltamos que há somente uma empresa no mundo que comercializa o rhTSH, cujo preço é exorbitante e que o nosso Grupo de Pesquisa já realizou a síntese de rhTSH em células CHO e, posteriormente, a síntese de uma forma humanizada deste hormônio, sempre com relativo depósito de patente. No processo de produção de glicoproteínas terapêuticas em células CHO, o conhecimento de aspectos do processo do cultivo celular que influenciam a glicosilação é extremamente importante para a obtenção de produtos com bioatividade e propriedades farmacológicas definidas. Isto especialmente considerando que a atividade biológica e, consequentemente a ação fisiológica e farmacológica das glicoproteínas, são altamente dependentes da sua porção glicídica, ou seja, da quantidade e estrutura dos oligossacarídeos (glicanos) que a constituem. No presente projeto nos propomos, portanto, a sintetizar e estudar preparações de hTSH com diferentes glicoformas, determinando a porcentagem de ocupação dos sítios de glicosilação (ou seja, quantos, em média, dos três sítios de N-glicosilação da molécula de hTSH estão ocupados), a qualidade e quantidade de estruturas específicas de N-glicanos e seu nível de sialilação. Estas preparações serão obtidas adicionando alguns compostos (íons e moléculas orgânicas) utilizados no cultivo das células CHO produtoras de hTSH, que causam alterações no perfil de glicosilação. Assim sendo, serão estudados os efeitos, neste perfil, do Mn+2, do butirato de sódio e da cicloheximida, individualmente e em combinação, em comparação com o hormônio natural, hipofisário e com o produto recombinante tradicional (ThyrogenR). Vale ressaltar que mesmo as estruturas glicídicas do hTSH natural e do recombinante tradicional ainda são pouco conhecidas e estudadas. Este tipo de estudo é extremamente relevante, tanto do ponto de vista do desenvolvimento de novos biofármacos quanto do ponto de vista do controle de qualidade das glicoproteínas hormonais já utilizadas na clínica médica. (AU)

Publicações científicas (4)
(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)
RIBELA, MARIA TERESA C. P.; DAMIANI, RENATA; SILVA, FELIPE D.; LIMA, ELIANA R.; OLIVEIRA, JOAO E.; PERONI, CIBELE N.; TORJESEN, PETER A.; SOARES, CARLOS R.; BARTOLINI, PAOLO. N-Glycoprofiling Analysis for Carbohydrate Composition and Site-Occupancy Determination in a Poly-Glycosylated Protein: Human Thyrotropin of Different Origins. INTERNATIONAL JOURNAL OF MOLECULAR SCIENCES, v. 18, n. 2 FEB 2017. Citações Web of Science: 2.
ALMEIDA, B. E.; DAMIANI, R.; OLIVEIRA, J. E.; DALMORA, S. L.; TORJESEN, P. A.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M. T. C. P. Reversed-phase high performance liquid chromatography as an alternative to animal bioassay for human thyrotropin potency determination. ANALYTICAL METHODS, v. 6, n. 17, p. 6688-6694, SEP 7 2014. Citações Web of Science: 8.
DAMIANI, RENATA; ALMEIDA, BEATRIZ E.; OLIVEIRA, JOAO E.; BARTOLINI, PAOLO; RIBELA, MARIA TERESA C. P. Enhancement of Human Thyrotropin Synthesis by Sodium Butyrate Addition to Serum-Free CHO Cell Culture. Applied Biochemistry and Biotechnology, v. 171, n. 7, p. 1658-1672, DEC 2013. Citações Web of Science: 12.
ALMEIDA, B. E.; OLIVEIRA, J. E.; DAMIANI, R.; DALMORA, S. L.; BARTOLINI, P.; RIBELA, M. T. C. P. Qualitative and quantitative reversed-phase high performance liquid chromatographic analysis of glycoprotein hormones in the presence of a large excess of human serum albumin. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 63, p. 160-164, APR 7 2012. Citações Web of Science: 2.

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