Oxidação de proteínas e atividade antioxidante da enzima 'Thiol Specific Antioxidant' (TSA)

• Processo: 95/09710-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Jovens Pesquisadores
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1996
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2003
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Luis Eduardo Soares Netto
• Beneficiário: Luis Eduardo Soares Netto
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Auxílio(s) vinculado(s): 02/02999-0 - Role of citosolic thioredoxin peroxidase in the antioxidante defense of yeast with dysfunctional mitochondria., AR.EXT; 00/06491-6 - Catalases and thioredoxin peroxidase protect saccharomyces cerevisiae against ca2+ -induced mitochondrial membrane permeabilization and cell death., AR.EXT; 98/09903-1 - Regulation of the thioredoxin peroxidase gene in yeast., AR.BR
• Bolsa(s) vinculada(s): 02/04470-7 - Caracterizacao da atividade e da funcao biologica de ohr (organic hydroperoxide resistance) em xylella fastidiosa., BP.IC; 01/08832-8 - Investigação em escala genômica do reparo de lesões oxidativas em leveduras, BP.MS; 01/13747-0 - Regulação da expressão e caracterização de tiorredoxina peroxidase mitocondrial, BP.DD; + mais bolsas vinculadas 00/12583-0 - Regulação da expressão e caracterização de tiorredoxina peroxidase mitocondrial, BP.MS; 00/12588-2 - Processo de glutatiolizacao como modulador da atividade proteica., BP.PD; 00/04194-4 - Oxidação de proteínas e atividade antioxidante de TSA, BP.TT; 00/01414-3 - Funcao e regulacao de um possivel gene antioxidante em saccharomyces cerevisiae., BP.IC; 99/05739-5 - Regulacao e caracterizacao de um possivel gene antioxidante homologo a tioredoxina peroxidase (tpx1)., BP.IC; 99/06150-5 - Caracterizacao da influencia do estado funcional da mitocondria na expressao do gene tsa1 em saccharomyces cerevisae., BP.DR; 98/02219-8 - Oxidação de proteínas e atividade antioxidante da enzima Thiol Specific Antioxidant (TSA), BP.TT; 97/14204-2 - Envolvimento da enzima antioxidante Thiol Specific Antioxidant (TSA) na resposta adaptativa de leveduras ao estresse oxidativo, estudo da regulação da expressão do gene para TSA, BP.MS; 97/05343-9 - Envolvimento da enzima antioxidante específica para tióis (TSA) nas respostas adaptativas de Saccharomyces cerevisae a diferentes situações de estresse, BP.AP; 96/11803-0 - Oxidação de proteínas e atividade antioxidante da enzima thiol specific antioxidant (TSA), BP.JP - menos bolsas vinculadas
• Assunto(s): Proteínas Oxidação Peroxidase Radicais livres Leveduras
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Levedura | Oxidacao | Peroxidase | Proteinas | Radical Livre | Tiol
• Publicação FAPESP: https://media.fapesp.br/bv/uploads/pdfs/Investindo...pesquisadores_105_112_112.pdf

Resumo

A oxidação de proteínas por radicais livres tem sido associada a vários processos patológicos como carcinogênese, envelhecimento e arterioesclerose. Thiol-specificantioxidant (TSA) é uma proteína antioxidante recentemente isolada de Saccharomyces cerevisae, cuja sequência de aminoácidos apresenta homologia com proteínas de diferentes grupos taxonômicos (bactérias, plantas e animais). Este projeto de pesquisa visa estudar diferentes tópicos relacionados com a atividade antioxidante de TSA e com a alteração de proteínas por radicais livres gerados em reações catalisadas por metais. Estudos realizados durante o meu programa de pós-doutorado no NIH demonstraram que as propriedades antioxidantes de TSA se devem ao fato de essa proteína possuir uma atividade peroxidática dependente de tiol. Pretende-se caracterizar essa atividade enzimática de TSA, determinando intermediários envolvidos no ciclo catalítico e os centros reativos da enzima. A maioria dos estudos realizados com TSA foi feita em sistemas enzimáticos. Para obter informações sobre a função celular de TSA, serão comparadas as linhagens selvagem e mutante de Saccharomyces cerevisae, cujo gene para TSA foi interrompido. Serão medidas taxas de crescimento, formação de 8-oxoguanina e H2O2 intracelular como índices de estresse oxidativo nas duas linhagens de levedura. Em relação à oxidação de proteínas por radicais livres, pretende-se obter provas mais definitivas de que a inativação de glutamina sintetase por sistemas oxidantes catalisados por metais se dá por um processo sítio-específico. O dano sítio-específico é um processo no qual espécies reativas como radical hidroxila são gerados por metais de transição complexados a biomoléculas. Dessa forma, essas espécies induzem dano proximamente ao local em que foram geradas. EDT A protege enzimas contra a inativação por remover metais complexados a proteínas, apesar de acelerar a formação de radicais livres durante a oxidação de tióis e ascorbato. Verificar-se-á se glutamina sintetase pode ser oxidada por reações catalisadas pelo complexo EDT A-Fe+3. E, ainda, a possibilidade de que 2-metil-histidina seja formada durante a interação de histidina com radicais metil. 2-metil-histidina poderá ser usada como marcadora da modificação de proteínas por radicais de carbono. (AU)